封闭是Western Blot 至关重要的一部分, 所以正确的封闭液选择可以让抗体更特异地和抗原结合,为成功的WB奠定基础。虽然这个步骤操作简单,但是封闭液的选择确是很多科研人员的难题。为了让大家更方便的选择适合自己实验的封闭液,这里给大家介绍6种不同的封闭液,以及它们的优缺点。
1、脱脂奶粉
最便宜而且最好买的封闭剂就属脱脂奶粉了。无论是从化学制品公司还是从超市购买,都可以直接拿来使用。通常封闭液的浓度为 2.5-5% (w/v)。但值得注意的是,脱脂奶粉是许多种蛋白质的混合物,其中含有酪蛋白,是一种磷蛋白。如果你的目标蛋白是磷蛋白的话,千万不要选择脱脂奶粉,否则会有很多背景信号。即使你的目标蛋白不是磷蛋白,因为是蛋白质的混合物,所以也容易产生较高的背景信号。
2、牛血清白蛋白(BSA)
牛血清白蛋白是从牛血清中提纯之后的一种球蛋白,是除了脱脂奶粉之外,非常常用的封闭剂。通常含有BSA的封闭液的浓度为2-5%(w/v)。但大家也可 以根据自己实验的需要来改变浓度,因为价格比较高,所以很多研究人员都是用尽可能低而有效的浓度。虽然BSA不是磷蛋白而且是单一蛋白,但是提纯过程中有 可能含有IgG或其他血清蛋白等污染物,这些蛋白都可以和哺乳动物抗体产生交叉反应,会增加非特异性背景信号 。
菲恩生物:提供高灵敏的BSA,elisa试剂盒:Bovine serum albumin(BSA) ELISA Kit货号:EB0148
高特异性单克隆抗体:anti- BSA antibody 货号FNab00969