FN-Click EdU Cell Proliferation Imaging Assay Kit (Green, FineTest®488)

FNCK110

FN-Click EdU细胞增殖成像检测试剂盒(绿色，FineTest®488)

50T/200T

注：规格50 T指是用6孔板进行实验可以检测50个样本。EdU (10 mM) 首次使用时需要分装（推荐 50 μL/小瓶或根据实验需要分装成更少量）。

-20°C 可保存 1 年。FineTest®488 Azide II和DAPI Reagent需要避光保存。

FN-Click EdU细胞增殖成像检测试剂盒(绿色，FineTest®488)，操作便捷、灵敏度高，适用于细胞爬片和涂片的增殖检测，检测结果可通过荧光显微镜进行分析。

细胞增殖检测广泛应用于细胞活性、遗传毒性及抗肿瘤药物效果的评价中，直接检测细胞中的DNA合成被认为是最精确的检测细胞增殖的方法。最初广泛使用的检测细胞中DNA合成的方法是放射性标记核苷掺入法，但该方法由于有放射性污染并且很难实现单细胞检测而受到很大的限制，随后逐渐被基于抗体检测的BrdU法所替代。BrdU法步骤繁多，且需要使用BrdU抗体，影响因素较多，稳定性较差。

EdU法基于EdU掺入和后续的点击反应，无需使用抗体、操作便捷、检测灵敏度高，是一种在BrdU法基础上升级换代的新方法，将会逐步取代BrdU法。EdU(5-ethynyl-2-deoxyuridine)，中文名5-乙炔基-2-脱氧尿苷，是胸腺嘧啶脱氧核苷类似物，EdU可以在DNA合成过程中替代胸腺嘧啶脱氧核苷掺入到新合成的DNA中。另一方面，EdU上的乙炔基能与荧光标记的小分子叠氮化物探针，通过一价铜离子的催化发生共价反应，形成稳定的三唑环，该反应非常迅速，被称作点击反应（Click reaction）。通过点击反应，新合成的DNA会被相应的荧光探针所标记，从而可以使用适当的荧光检测设备检测到增殖的细胞。

实验结果参考下图：

1.试剂

PBS（pH7.2-7.6)；PBS（含3% BSA）缓冲液（pH7.2-7.6）；通透液：0.3% Triton X-100（溶剂为PBS，pH7.2-7.6）；固定液：4%多聚甲醛（溶剂为PBS，pH7.2-7.6）；去离子水。

2.仪器

荧光显微镜

1.Click Additive Solution

取1.1 mL去离子水加入到一管Click Additive(220 mg)中，混匀至全部溶解。配制后可以适当分装，并于-20℃保存。

注：建议使用完一管Click Additive后再配制下一管。

2.DAPI 工作液：取4 μL DAPI Reagent加入96 μL PBS中混匀。现配现用。

1. EdU的标记浓度应根据所用的细胞类型做相应的优化选择，推荐以10 μM的EdU初始浓度进行摸索，请提前做预实验确认EdU的最佳使用浓度。

2. 由于EdU标记反应在细胞内进行，且通过荧光显微镜检测，EdU标记前请确保细胞固定通透完全。如冬天室温过低，建议适当延长固定时间或4℃固定过夜。

3. Click Additive配制成溶液后请注意适当分装。如果溶解后有白色物质析出，请上下颠倒多次，待全部溶解后方可使用。如该溶液颜色变成棕色，说明组分的有效成分已失效，请弃用。

4. 铜离子会影响GFP、RFP、mCherry等荧光蛋白的荧光，因此本试剂盒不适用于带GFP、RFP、mCherry等荧光的细胞检测。

5. 本产品仅限于专业人员的科学研究用。

6. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。