我们在使用大肠杆菌表达异源蛋白（特别是真核蛋白）时，由于原核表达系统缺乏翻译后修饰，合成速度过快导致二硫键错配，而使目的蛋白常常以不可溶的包涵体表达。
一、有利因素
尽管是没有生物活性的聚集体，但以包涵体形式表达也有其有利的因素：
1、可溶性蛋白在细胞内容易受到蛋白酶的攻击，包涵体表达可以避免蛋白酶对外源蛋白的降解；
2、降低了胞内外源蛋白的浓度，有利于表达量的提高；
3、包涵体中杂蛋白含量较低，且只需要简单的低速离心就可以与可溶性蛋白分离，有利于分离纯化；
4、对机械搅拌和超声破碎不敏感。所以只要能够在体外成功复性，将是大量生产重组蛋白很有效的途径之一。
包涵体在复性前的处理是很重要的。包涵体中除了目的蛋白，也含有一些细菌成分，一些外膜蛋白、质粒ＤＮＡ和其它杂质，洗涤常用1%以下的中性去垢剂，如Tween、Triton和NP40等加EDTA和还原剂2-巯基苏糖醇（DTT）、β-巯基乙醇等反复多次进行。
包涵体表面吸附的大部分不溶性杂蛋白，常用低浓度的盐酸胍或尿素/中性去垢剂/EDTA/还原剂等洗去。洗涤液pH以与工程菌生理条件相近为宜，使用的还原剂为0.1-5mM。EDTA为0.1-0.3 mM。
包涵体在经过充分的洗涤-离心几个循环后，杂质已经非常少了，一般来说，包涵体蛋白越纯，复性效果越好。溶解通常用高浓度的变性剂，6-8M的盐酸胍或尿素。尿素在碱性条件下会修饰蛋白的氨基，所以常与Tris-HCl缓冲系统联用。而盐酸胍的变性能力更强，通常在尿素无法溶解时尝试。
包涵体的复性是一项集理论，经验，运气的复杂工作，没有定理可寻。但还是有一些基本的原则需要遵守。复性的起始浓度需要在0.1mg/ml以下，过高的起始浓度容易造成聚集沉淀。无论是用透析法还是稀释法，变性剂浓度的变化要尽可能的平滑。谷胱甘肽用来促进二硫键的正确搭配，其浓度需要根据二硫键的数量来摸索。
以上就是包涵体纯化和复性的小Tip，希望对大家有所帮助。