内参抗体

内参蛋白对于哺乳动物细胞表达来说一般是指由管家基因编码表达的蛋白,它们在各组织和细胞中的表达相对恒定,在检测蛋白的表达水平变化时常用它来做参照物。FineTest提供全套单克隆和多克隆内参抗体,高特异性和多种应用类型,可满足您大多数蛋白定性,定量和定位分析。除了常见的人,小鼠,大鼠,我们还提供更多其他种属如兔、斑马鱼、猴子等的内参抗体,以及各种定制包装服务。

抗体验证示例:

FNab03342 GAPDH Antibody验证图片

人结肠癌组化
人结肠癌组化
WB
WB

FNab00880 Beta Tubulin antibody验证图片

大鼠睾丸组化
大鼠睾丸组化
WB
WB

如何选择合适的内参抗体

01 考虑目的蛋白分子量,一般需要与目的蛋白分子量相差5kD以上;

02 根据蛋白表达位置选择不同的内参,不同细胞器选择的内参也不同。

样本类型 内参选择 兔多抗 鼠单抗 内参分子量(kDa)
全细胞、细胞质 β-actin FNab00869 FNab00873 42
α-actin FNab00319  
GAPDH FNab03342 FNab03343 36
β-tubulin FNab00880 FNab09105 50-55
α-tubulin FNab00333 FNab00335
vinculin((分子量大时选择) FNab09799 FNab09800 117
细胞核 Lamin B1 FNab04682 FNab04683 66
TBP FNab10263 FNab08527 38
YY1 FNab10027   65-70
Histone H3 FNab03888   18
PCNA FNab06215 FNab06217 38
HDAC1 FNab03792 FNab03793 55
细胞膜 ATP1A1 FNab00691   100-110
线粒体 VDAC1 FNab09826   31
COXIV FNab01912 FNab01914 17-20
内质网 calreticulin FNab01224   55-60
高尔基体 GM130 FNab03558   130
溶酶体 LAMP2 FNab04686 FNab09834 100-120
血液 Transferrin FNab08929 FNab08930 77

03 考虑组织特异性。以下为各种小鼠组织中常见内参的表达水平,供大家参考。

各种小鼠组织类型中常见上样对照抗体的表达水平

  Brain Spleen Skeletal
Muscle
Kidney Pancreas Testis Skin Eye Heart Lung
a-Tubulin Low
β-Actin Low Low
β-Tubulin Low Low
COX IV
GAPDH
Histone H3 Low Low
β3-Tubulin Low Low Low Low Low

内参抗体使用方法

01 标记内参使用法:只要在二抗孵育时加入HRP标记内参抗体,按照正常操作即可。
02 普通内参:当目的蛋白的分子量大小与选用的内参蛋白分子量相差不大时,可以先进行目的蛋白的抗体温育显色和检测。然后使用Strip缓冲液洗掉膜上的抗体,重新进行内参蛋白的抗体温育、显色检测。
03 当目的蛋白的分子量大小与选用的内参蛋白分子量大小相差比较明显情况下,可以在转膜后预染,根据蛋白质Marker的大小将膜剪为大分子量和小分子量两部分,使内参蛋白与目的蛋白分开。然后两块膜分别与内参蛋白抗体以及目的蛋白抗体进行。