流式细胞术6种免疫细胞类型及其表型

免疫系统是人体抵御病原体和维持体内环境稳定的重要防线，由多种细胞类型组成，每种细胞都有其独特的表型（即表面标志物）和功能。流式细胞术常用于监测治疗或疾病进程对外周血细胞亚群和蛋白表达的影响，即免疫监测。该技术涉及表面蛋白标记，以评估成熟细胞亚群。更深入的分析可结合细胞因子和转录因子。下面为大家介绍一些主要的免疫细胞类型及其表型。

1.骨干细胞

全血分析中常用的骨干标记包括：CD34（造血干细胞和祖细胞）、CD45（泛造血系）、CD15/CD66b（中性粒细胞、嗜酸性粒细胞及PMN-MDSC）、CD14/CD33/CD11c（单核细胞）、CD19（B细胞）、CD56（NK和NKT细胞）、CD3（T细胞）、CD127（ILC）、CD123（浆细胞样树突状细胞和嗜碱性粒细胞）、TCRVα7.2（MAIT细胞）以及CD117（肥大细胞）。其中，CD34用于识别并可能排除祖细胞，这对白血病等血液恶性肿瘤的研究至关重要。此外，根据样本处理方式（如Ficoll分离），某些标记如CD66b或CD15可能不再必要。对于单核细胞，也可考虑使用CD33或CD64作为替代标记。

2.T淋巴细胞

T淋巴细胞分类基于CD3阳性并排除CD34、CD19和CD14，进一步区分需检测特定标记：γδ T细胞（γδTCR）、MAIT细胞（TCRVα7.2）、NKT细胞（TCRVα24-Jα18）。为确保αβ T细胞纯净度，先对上述标记门控，再对CD56门控。CD4和CD8定义单阳性和双阳性亚群，并通过CD197、CD45RA、CD27、CD28等标记区分幼稚、效应或记忆状态。辅助性（Th）与细胞毒性（CTL）T细胞通过CCR10、CXCR3、CXCR5、CCR4、CCR6识别。特殊亚群如Tfh（CXCR5+）、Tfr（调节B细胞反应）及Treg（CD25+/CD127lo/-），其功能表型还需结合细胞因子或转录因子确认。

3.自然杀伤细胞亚群标记

自然杀伤（NK）细胞与NKT细胞的主要区别在于NK细胞不表达CD3，且通常CD94阳性。NK细胞根据CD56的表达水平分为成熟（CD56dim）、终末（也可能为CD56dim CD57+）和早期（CD56bright）阶段。此外，通过CD127的表达可进一步区分NK细胞和先天淋巴细胞（ILC），其中NK细胞为CD3-/CD127lo/-，而ILC则为CD3-/CD127+。

4.单核细胞

单核细胞和巨噬细胞是免疫系统的关键成分，分别循环于血液中和驻留于组织内，负责清除病原体、肿瘤细胞及死亡细胞碎片。单核细胞约占白细胞10%，以CD3-/CD14+/CD11c+标记定义，并根据CD16和HLA-DR表达分为经典型（CD14 hi/CD16-）、中间型（CD14 hi/CD16+/hi）和非经典型（CD14 low/CD16 hi）。它们分别具有抗微生物、抗原呈递和抗病毒功能，且在激活后能分泌炎症细胞因子并分化为巨噬细胞或树突状细胞，参与适应性和先天性免疫反应。监测巨噬细胞时，可使用CD80（M1型）和CD206（M2型）作为标记。

5.B细胞

B淋巴细胞，作为适应性免疫的关键成员，可通过CD45+/CD3-/CD19+标记识别，其中CD19是首选，因其在B细胞祖细胞上最先表达。B细胞高度多样化，需产生多样BCR，并分为记忆、天真和效应亚群。类别转换使激活的B细胞改变重链类型以优化体液免疫反应。常用CD20、CD10、CD5、CD27、CD38、IgD、IgM、CD24组合识别B细胞亚群，特别是通过CD10、CD27和IgD区分记忆B细胞。CD27标志约40%的外周B细胞，指示抗原特异性记忆和抗体生产能力。

6.粒细胞

粒细胞，包括中性粒细胞、嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞，特征为多叶核和高散射特性。嗜碱性粒细胞表达CD45 lo/CD3-/CD14-/CD66b-/CD123 hi，占白细胞1%，参与过敏反应。中性粒细胞和嗜酸性粒细胞表达CD15和CD66b，前者是感染首应者，后者主要对抗寄生虫。肥大细胞，表达FcεRIa和CD117，参与IgE介导的反应。各类型粒细胞在流式细胞术中通过特定标记区分，确保精确识别。

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