Foxp3/Transcription Factor Staining Kit

K081

20T

2-8°C for 6 months

该产品是一款经过优化的专门针对转录因子、核蛋白（例如 Foxp3 和 STAT3）等流式抗体进行细胞核内抗原染色时所用的固定、破膜试剂。

1.本试剂盒中 Fixation Concentrate (4×)为 4×浓缩液，实验前用 Fixation Dilution Solution [E-CK-A108B] 稀释成 1×Fixation Working Solution。

2.本试剂盒中 Permeabilization Buffer (10×)为 10×浓缩液，实验前加去离子水稀释成 1×Permeabilization Working Solution。

1. 取 100 μL 细胞/管（约 1×10⁶ 个细胞）于流式管内。

2. [可选步骤] 根据说明书进行 Fixable Viability Dye（死活细胞鉴定染料）染色。

3. [可选步骤] 根据实验需求对细胞悬液进行 Fc 受体封闭。

4. 按照抗体说明书加荧光标记抗体染细胞表面 Marker。

5. 孵育完成后加入 1 mL 细胞染色缓冲液[K079]，300×g 离心 5min，弃上清，再加入 100 uL 细胞染色缓冲液[K079]重悬细胞。

6. 加入 1 mL 1×Fixation Working Solution，涡旋混匀，4℃反应 30min，反应完后，600×g 离心 5min，弃上清。

7. 加入 2 mL 1×Permeabilization Working Solution，涡旋混匀，600×g 离心 5min，弃上清。

8. 重复步骤 7。

9. 加入 100 μL 1×Permeabilization Working Solution 重悬细胞。

10. 按照抗体使用说明书加荧光标记的核染色抗体，混匀后室温避光孵育 30 min。

11. 加入 2 mL 1×Permeabilization Working Solution，600×g 离心 5 min，弃上清。

12. 加入适量细胞染色缓冲液[K079]重悬细胞，即可上机检测。

1.Permeabilization Buffer (10×)有沉淀属于正常现象，不影响使用效果。

2.固定和破膜步骤可能会改变细胞的光散射特性，并可能增加非特异性背景染色。在染色过程中加入 BSA 或胎牛血清（FCS）等蛋白质可能有助于减少非特异性背景。此外，建议使用 Fixable Viability Dye（死活细胞鉴定染料），以帮助排除数据分析过程中的死细胞。

3.本产品仅限科研使用，不得用于临床诊断或治疗。

4.为了您的安全和健康，请穿上实验服，戴上一次性手套。