Intracellular Fixation/Permeabilization Buffer Kit (Ready To Use)

K082R

胞内因子固定破膜剂(即用型)

50T/100T/500T

2-8°C 可保存一年。

该产品是一款经过优化的专门针对细胞因子和趋化 因子等细胞内抗原染色时所用的固定、破膜试剂。

1. 取 100 μL 细胞/管（约 1×10⁶ 个细胞）于流式管内。

2. [可选步骤] 根据说明书进行细胞死活（死活细胞鉴定染料，自备）染色。

3. [可选步骤] 根据实验需求对细胞悬液进行 Fc 受体封闭（Fc受体封闭试剂，自备）。

4. 按照抗体说明书加荧光标记抗体染细胞表面 Marker。

5. 孵育完成后加入 1 mL PBS（含 1% BSA）重悬细胞，300×g 离心 5min，弃上清。

6. 加入 200 µL PBS（含 1% BSA）重悬细胞，然后加入 200 µL Fixation Buffer 混匀，于室温避光孵育 30~60 min（室温低于 25°C 时请适当延长孵育时间到 60 min）。600×g 离心 5min，弃上清

7. 加入 1 mL PBS（含 1% BSA）重悬细胞，600×g 离心 5min，弃上清。

注意：如果来不及做完所有步骤，这步可以加完PBS（含 1% BSA）重悬细胞后放4度，第2天离心。

8. 加入 100 µL Permeabilization Buffer 重悬细胞，按照抗体使用说明书加入相应的胞内染

抗体，混匀后室温避光孵育 30 min。

9. 加入 1 mL PBS（含 1% BSA），600×g 离心 5 min，弃上清。

10. 加入适量 PBS 重悬细胞，即可上机检测。

1.本产品仅限科学研究用。

2.固定和破膜步骤可能会改变细胞的光散射特性，并可能增加非特异性背景染色。在染色过程中加入 BSA 或胎牛血清（FBS）等有助于降低非特异性背景。此外，建议使用 氨基反应性的死活细胞鉴定染料，以帮助排除数据分析过程中的死细胞。

3.本产品能与大部分商用流式抗体兼容，但某些抗原决定簇对固定剂敏感，不能兼容。

4.为了您的安全和健康，请穿上实验服，戴上一次性手套。

5.固定和破膜试剂都是即用型。