Annexin V-APC/DAPI Apoptosis Kit

货号: 
K020
规格: 
20T/50T/100T
存储条件: 
2-8°C for 12 months. Annexin V-APC and 7-AAD need to be stored away from light.
应用: 
Cell apoptosis
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  • 实验结果
  • 实验条件
货号

K020

中文名称

Annexin V-APC/DAPI凋亡检测试剂盒

规格

20T/50T/100T

试剂盒组份

Reagents

20T

50T

100T

Annexin V-APC

100μL

250μL

500μL

1X Binding Buffer

10mL

25mL

50mL

DAPI

100μL

250μL

500μL

保存条件

2-8°C保存一年。 Annexin V-APC和DAPI试剂要避光保存,禁止冷冻保存。

运输条件

冰袋

实验原理

Annexin V-APC/DAPI细胞凋亡检测试剂盒可检测悬浮细胞和贴壁细胞的凋亡情况。

Annexin V是一种钙依赖性磷脂酰丝氨酸结合蛋白,对磷脂酰丝氨酸PS具有高亲和力,Annexin V-APC可以通过暴露在细胞外的PS与早期凋亡细胞的细胞膜结合。细胞凋亡可通过流式细胞术或荧光显微镜检测。

由于凋亡晚期或坏死细胞膜丧失完整性,而 4',6-二脒基-2-苯基吲哚二盐酸盐(4',6-Diamidino-2-Phenylindole, DAPI)可与双链 DNA 特异性结合并产生强烈的荧光,与AnnexinV搭配使用,可区分处于不同凋亡时期的细胞。

实验步骤

A. Annexin V-APC与细胞孵育

1. 按照实验方案诱导细胞凋亡。300 g离心5分钟,丢弃上清,收集细胞,用PBS轻轻重悬细胞并计数。

2. 离心收集1-5 × 105个细胞,丢弃上清。PBS洗涤细胞1次,离心后弃上清。

3. 用500µl 1X Binding Buffer重悬细胞。

4. 加入5µl Annexin V-APC和5µl DAPI。

5. 轻轻涡旋混匀,室温避光孵育15分钟。

6. 立即检测,如果不能及时检测,请放冰上避光静置并在1小时内完成检测。

B.流式细胞术定量

流式细胞仪检查Annexin V-APC可用APC通道,DAPI检测优先选择DAPI通道,其次是Pacific Blue 通道。

对于贴壁细胞,首先收集细胞培养液,PBS洗涤细胞一次后用胰酶消化细胞,然后加入收集的细胞培养液,把细胞轻轻吹下来,离心弃上清,细胞用PBS重悬并计数,之后进行步骤A.2-5。

C.荧光显微镜检测

将步骤A.5中的细胞悬液涂布在载玻片上。用盖玻片盖住细胞。

如果分析贴壁细胞,直接在细胞爬片上培养细胞。孵育后(A.5),将细胞爬片倒置在玻片上,观察细胞。

注意事项

1.染色后应尽快检测。时间过长可能导致凋亡或坏死细胞数量增加。

2.检测贴壁细胞时,应收集诱导凋亡后产生的悬浮细胞与随后收集的贴壁细胞一起检测。

3.尽量避免消化贴壁细胞造成的机械损伤。同时,胰酶的消化液应尽可能不含EDTA,因为EDTA影响Annexin V与磷脂酰丝氨酸的结合。

4.如果使用含有EDTA的胰酶,收集后应彻底清洗细胞,以确保EDTA被去除。

5.荧光物质容易猝灭,在进行荧光观察时,尽量缩短观察时间,同时在操作和储存过程中也要尽量注意保光。

6.为了您的安全和健康,请穿上实验服,戴上一次性手套。

7.本产品仅供科学研究使用。

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