Annexin V-FineTest®647/DAPI Apoptosis Kit

K021

Annexin V-FineTest®647/DAPI凋亡检测试剂盒

20T/50T/100T

2-8°C保存一年。 Annexin V-FineTest®647和DAPI试剂要避光保存，禁止冷冻保存

冰袋

Annexin V-FineTest®647/DAPI细胞凋亡检测试剂盒可检测悬浮细胞和贴壁细胞的凋亡情况。

Annexin V是一种钙依赖性磷脂酰丝氨酸结合蛋白，对磷脂酰丝氨酸PS具有高亲和力，Annexin V-FineTest®647可以通过暴露在细胞外的PS与早期凋亡细胞的细胞膜结合。细胞凋亡可通过流式细胞术或荧光显微镜检测。

由于凋亡晚期或坏死细胞膜丧失完整性，而 4',6-二脒基-2-苯基吲哚二盐酸盐（4',6-Diamidino-2-Phenylindole, DAPI）可与双链 DNA 特异性结合并产生强烈的荧光，与AnnexinV搭配使用，可区分处于不同凋亡时期的细胞。

A. Annexin V-FineTest®647与细胞孵育

1. 按照实验方案诱导细胞凋亡。300 g离心5分钟，丢弃上清，收集细胞，用PBS轻轻重悬细胞并计数。

2. 离心收集1-5 × 105个细胞，丢弃上清。PBS洗涤细胞1次，离心后弃上清。

3. 用500µl 1X Binding Buffer重悬细胞。

4. 加入5µl Annexin V-FineTest®647和5µl DAPI。

5. 轻轻涡旋混匀，室温避光孵育15分钟。

6. 立即检测，如果不能及时检测，请放冰上避光静置并在1小时内完成检测。

B.流式细胞术定量

流式细胞术分析Annexin V-FineTest®647，可用APC信号检测器，DAPI检测优先选择DAPI通道，其次是Pacific Blue 通道。

对于贴壁细胞，首先收集细胞培养液，PBS洗涤细胞一次后用胰酶消化细胞，然后加入收集的细胞培养液，把细胞轻轻吹下来，离心弃上清，细胞用PBS重悬并计数，之后进行步骤A.2-5。

C.荧光显微镜检测

将步骤A.5中的细胞悬液涂布在载玻片上。用盖玻片盖住细胞。

如果分析贴壁细胞，直接在细胞爬片上培养细胞。孵育后(A.5)，将细胞爬片倒置在玻片上，观察细胞。

1. 染色后应尽快检测。时间过长可能导致凋亡或坏死细胞数量增加。

2.检测贴壁细胞时，应收集诱导凋亡后产生的悬浮细胞与随后收集的贴壁细胞一起检测。

3.尽量避免消化贴壁细胞造成的机械损伤。同时，胰酶的消化液应尽可能不含EDTA，因为EDTA影响Annexin V与磷脂酰丝氨酸的结合。

4.如果使用含有EDTA的胰酶，收集后应彻底清洗细胞，以确保EDTA被去除。

5.荧光物质容易猝灭，在进行荧光观察时，尽量缩短观察时间，同时在操作和储存过程中也要尽量注意保光。

6.为了您的安全和健康，请穿上实验服，戴上一次性手套。

7.本产品仅供科学研究使用。