Intracellular Fixation/Permeabilization Buffer Kit

K082

50T/100T/500T

2-8°C for 12 months

该产品是一款经过优化的专门针对细胞因子和趋化 因子等细胞内抗原染色时所用的固定、破膜试剂。

本试剂盒中 Permeabilization Buffer (5×)为 5×浓缩液，实验前用去离子水稀释成1×Permeabilization Working Solution。

注：1×Permeabilization Working Solution 建议现配现用，配制好的工作液尽量在 3 天内用完。

1. 取 100 μL 细胞/管（约 1×10⁶ 个细胞）于流式管内。

2. [可选步骤] 根据说明书进行 Fixable Viability Dye（死活细胞鉴定染料，自备）染色。

3. [可选步骤] 根据实验需求对细胞悬液进行 Fc 受体封闭。

4. 按照抗体说明书加荧光标记抗体染细胞表面 Marker。

5. 孵育完成后加入 2 mL PBS（含 1% BSA）或 Cell Staining Buffer [K079]重悬细胞，300×g 离心 5min，弃上清。

6. 加入 200 µL PBS（含 1% BSA）或 Cell Staining Buffer [K079]重悬细胞，然后加入 200 µL Fixation Buffer 于室温避光孵育 30~60 min（室温低于 25°C 时请适当延长孵育时间到 60 min）。

7. 加入 1 mL 1×Permeabilization Working Solution，600×g 离心 5min，弃上清。

8. 加入 100 µL 1×Permeabilization Working Solution 重悬细胞，按照抗体使用说明书加入相应的胞内染抗体，混匀后室温避光孵育 30 min。

9. 加入 2 mL PBS（含 1% BSA）或 Cell Staining Buffer [K079]，600×g 离心 5 min，弃上清。

10. 加入适量 PBS 或 Cell Staining Buffer [K079]重悬细胞，即可上机检测。

1.由于 Permeabilization Buffer (5×) 可能会出现沉淀，属于正常现象，不影响使用效果。

2.对于有红细胞的样本，使用该产品前先进行红细胞裂解。

3.固定和破膜步骤可能会改变细胞的光散射特性，并可能增加非特异性背景染色。在染色过程中加入 BSA 或胎牛血清（FBS）等有助于降低非特异性背景。此外，建议使用 Fixable Viability Dye（死活细胞鉴定 染料），以帮助排除数据分析过程中的死细胞。

4.本产品能与大部分商用流式抗体兼容，但某些抗原决定簇对固定剂敏感，固定时间需要根据实际情况进 行优化。

5.为了您的安全和健康，请穿上实验服，戴上一次性手套。