- 货号
K085
- 规格
48T(32S)/ 96T(80S)
- 检测仪器
酶标仪(500-510 nm)
- 适用种属
Universal
- 应用
用于定量检测全血、血清、血浆、组织样本中的葡萄糖含量。
- 储存条件
2-8°C避光保存6个月
- 保质期
见试剂盒标签
- 注
仅供科研使用
- 试剂盒组件
编号
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名称
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规格1
48T
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规格2
96T
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储存条件
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试剂一
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酚溶液(Phenol Solution)
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10 mLx1 瓶
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20 mLx1 瓶
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2-8°C避光保存6个月
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试剂二
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酶溶液(Enzyme Solution)
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10 mLx1 瓶
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20 mLx1 瓶
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2-8°C避光保存6个月
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试剂三
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50 mmol/L 葡萄糖标准品(Glucose Standard)
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1.2 mLx1 管
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1.2 mLx1 管
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2-8°C保存6个月
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- 实验原理
葡萄糖氧化酶(GOD)能催化葡萄糖氧化成葡萄糖酸,产生过氧化氢,在色原性氧受体的存在下,过氧化物酶催化过氧化氢,氧化色素源,生成有色物质。
- 试剂盒组件外所需器材和试剂
1.酶标仪(500-510 nm)
2.96孔板
3.精密的移液器以及干净的一次性枪头
4.干净的EP管
5.生理盐水,双蒸水
6.台式离心机
7.恒温水浴/培养箱
- 样品处理
血清血浆样本:可直接测定。
全血样本:取新鲜血液加入到盛有抗凝剂(肝素作为抗凝剂,肝素浓度为:10-12.5 IU/mL 血液)的管中,颠倒混匀,取0.1 mL加入0.4 mL双蒸水,充分混匀1 min,静置15 min,制备的5倍溶血液,对光观察澄清透亮待测。
在正式检测前,需选择2-3个预期差异大的样本稀释成不同浓度进行预实 验,可参考 下表进行稀释(仅供参考):
样本
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稀释倍数
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样本
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稀释倍数
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人血清
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不稀释
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人血浆
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不稀释
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大鼠血清
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不稀释
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小鼠血清
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不稀释
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注:稀释液为生理盐水(0.9% NaCl)。
- 试剂准备
1、检测前,试剂盒中的试剂平衡至室温。
2、酶工作液的配制:
将试剂一:试剂二按1:1的体积比混匀,现用现配,2-8°С避光保存24 h。
3、对照工作液的配制:
将生理盐水:试剂二按1:1的体积比混匀,现用现配,2-8°С避光保存24 h。
4、不同浓度标准品的稀释
编号
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1
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2
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3
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4
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5
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6
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7
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8
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配制的标准品浓度(mmol/L)
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0
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2
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5
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10
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15
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20
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25
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30
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50 mmol/L 标准品(μL)
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0
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4
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10
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20
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30
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40
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50
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60
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双蒸水(μL)
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100
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96
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90
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80
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70
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60
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50
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40
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- 测定步骤
1、标准孔:取3 μL 8个不同浓度的标准品,分别加入对应的标准孔中;
测定孔:取3 μL待测样本,触底加入样本孔中;
对照孔:取3 μL待测样本,触底加入样本孔中。
2、向步骤1中标准孔和测定孔加入300 μL酶工作液。 向步骤1中对照孔加入300 μL对照工作液。
3、37°С孵育15 min。酶标仪505 nm,测各孔OD值。
注:全血及溶血的血清血浆样本需要设置对照,正常血清血浆不用设置 对照。
- 操作表
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标准孔
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测定孔
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对照孔
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不同浓度Glu标准品(μL)
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3
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待测样本(μL)
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3
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3
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酶工作液(μL)
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300
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300
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对照工作液(μL)
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300
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37°С孵育15 min,酶标仪505 nm,测各孔OD值。
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- 结果计算
标准品拟合曲线:y=ax+b
正常血清(浆)样本,Glu浓度计算公式: Glu 含量(mmol/L)= (ΔA505 - b) ÷ a × f
全血及溶血样本,设置对照时Glu浓度计算公式: Glu 含量(mmol/L)= (ΔA’ - b) ÷ a × f
注释: y:标准测定OD值-空白OD值; x:标准品的浓度; a:标曲的斜率;b:标曲的截距 ;
ΔA505:样本测定OD值-空白OD值 ;ΔA’: 样本测定OD值-样本对照OD值; f:样本加入检测体系前的稀释倍数
- 注意事项
1、 试剂盒仅供研究使用。实验前请仔细阅读说明书并调整好仪器,严格按照说明书进行实验。 实验中请穿着实验服并戴乳胶手套做好防护工作。
2、 试剂盒检测范围不等同于样本中待测物的浓度范围。如果样品中待测物浓度过高或过低,请对样本做适当的稀释或浓缩。若所检样本不在说明书所列样本类型之中,建议先做预实验验证其检测有效性。
3、最终的实验结果与试剂的有效性、实验者的相关操作以及实验环境等因 素密切相关。本公司只对试剂盒本身负责,不对由于使用试剂盒所造成的样本消耗负责,使用前请充分考虑样本可能的使用量,预留充足的样本。