PCR Master Mix (Green, 2X)

K091

1mL/1ml*5

-20℃保存，至少一年有效。适当避免反复冻融。如需频繁使用，可取适量存放于4℃，至少3天内有效。

PCR Master Mix (Green, 2X)使用了特别便捷的蓝色和橙色染料（电泳位置分别为4kb和50bp），含有2X Taq DNA Polymerase，2X PCR Buffer，2X dNTP和2X Loading Buffer，只需加入适量引物、模板和水即可进行PCR扩增，扩增完成后可直接上样电泳。

该产品主要适用于cDNA或基因组DNA等的常规PCR扩增，特别适合于定性或半定量的PCR扩增，也可用于长度小于2kb的DNA片段的扩增和克隆。可以扩增出长达8kb的片段，但通常更适合用于扩增2kb以下的DNA片段。

本产品中加入了蓝色和橙色的电泳示踪染料(整体呈现绿色)，其在浓度为1%琼脂糖胶中的迁移位置分别大约位于4kb和50bp处。PCR结束后可直接进行电泳检测，无需再添加上样缓冲液。蓝色和橙色示踪染料不会影响对相应DNA条带的观察和检测。

本产品稳定性高，经测试，反复冻融15次后对PCR的扩增效果无显著影响。

1mL用于50微升的PCR反应体系，足够做40个样本；用于20微升的PCR反应体系，足够用于100个样本。

一、设置PCR反应体系：

1.室温融解PCR Master Mix (Green,2X)，上下颠倒轻轻混匀后低速离心数秒。

2. 参考下表在冰浴条件设置PCR反应体系。

注意：对于不同类型的模板在50μl反应体积中推荐用量如下：

哺乳动物基因组DNA：0.1-1μg；大肠杆菌基因组DNA：10-100ng；质粒DNA：0.1-10ng。

3.用移液器轻轻吹打混匀，室温离心数秒，使液体积聚于管底。

4.按把设置好的PCR反应体系置于PCR仪上，开始PCR反应。

二、PCR反应参数的设置可以参考如下：

STEP1(起始变性): 94℃ 3min

STEP2(变性): 94℃ 30sec

STEP3(退火): 55℃ 30sec

STEP4(延伸): 72℃ 15-60s/kb

STEP5(循环): Go To STEP2 for 30 cycles

STEP6(最终延伸): 72℃ 10min

STEP7(临时保存): 4℃ forever

注：延伸步骤的时间设置需根据PCR产物的长度进行设置，推荐每kb产物的延伸时间为1分钟。

三、结果检测

PCR结束后直接取5-10μl进行电泳检测，无需添加上样缓冲液。

1.由于PCR反应非常灵敏可以扩增目的基因序列超过1000万倍，反应时时请注意避免微量待扩增DNA的污染，并尽量考虑设置不加模板的空白对照以确认是否有待扩增DNA的污染。

2.Taq DNA polymerase在PCR过程中每循环的出错几率约为2.2×10-5，对于大于1kb的DNA片段的克隆推荐使用出错几率更低的高保真DNA聚合酶。对于普通的PCR或RT-PCR定性检测或定量检测，Taq DNA polymerase是最佳选择。

3.尽管本产品经过15次反复冻融后仍具有和冻融前几乎相同的PCR扩增效果，但仍宜适当避免反复冻融本产品，多次反复冻融可能使产品性能下降。

4.本产品仅限科研人员使用，不能用于临床诊断或治疗，食品或药品，不得存放于普通住宅。

5.为了您的安全和健康，请穿好衣服，戴好一次性手套。