产品
Alanine Aminotransferase (ALT/GPT) Activity Assay Kit
- 货号
K097
- 中文名称
谷丙转氨酶（ALT/GPT）比色法试剂盒
- 规格
96T(42 samples)
- 检测范围
0.75-72.30IU/L
- 灵敏度
0.75IU/L
- 试剂盒组件
编号
名称
规格（96T）
保存方式
试剂一(Reagent 1)
缓冲液(Buffer Solution)
0.5 mL
2-8℃
试剂二(Reagent 2)
2 mmol/L丙酮酸钠溶液(2 mmol/L Sodium Pyruvate)
0.5 mL
2-8℃
试剂三(Reagent 3)
底物基质溶液(Substrate Solution)
5 mL
2-8℃
试剂四(Reagent 4)
显色剂(Chromogenic Agent)
5 mL
2-8℃，避光
试剂五(Reagent 5)
碱溶液(Alkali Reagent)
5 mL
2-8℃
说明书
1 份
- 保存条件
2-8℃避光条件下保存6个月。
- 检测原理
在37℃、pH7.4条件下，谷丙转氨酶（ALT）催化丙氨酸与α-酮戊二酸之间的氨基转换反应，生成丙酮酸和谷氨酸，反应一段时间后，加入苯肼，与丙酮酸生成苯腙，苯腙在碱性条件下呈红棕色。通过测量在510 nm处OD值来计算谷丙转氨酶活力。
本试剂盒适用于检测血清（浆）、动物组织、细胞和细胞上清中的ALT活力。
本试剂盒检测组织或细胞时，需测定总蛋白浓度，推荐使用本公司BCA蛋白浓度测定试剂盒 (货号K001)进行测定。
- 检测步骤 (仅供参考)
1.试剂准备:
a.检测前，试剂平衡至室温。
b.试剂五工作液：
将试剂五：双蒸水按照1: 9的体积比稀释，现用现配。
C.取部分试剂三，在37℃恒温箱中预温10 min。
2.样品的制备:
a.样本处理
血清(浆)等液体样本：直接测定。
组织样本：组织样本使用生理盐水(0.9% NaCl)匀浆处理。离心后取上清进行测定，部分上清样本用于蛋白浓度测定。
细胞样本：细胞样本使用生理盐水(0.9% NaCl)进行机械匀浆或超声破碎。匀浆离心后取上清进行测定，部分上清样本用于蛋白浓度测定。
b.样本的稀释
在正式检测前，需选择2-3个预期差异大的样本稀释成不同浓度进行预实验，根据预实验的结果，结合本试剂盒的线性范围：0.75-72.30 IU/L，请参考下表稀释(仅供参考)：
样本
稀释倍数
样本
稀释倍数
人血清
不稀释
10%大鼠脑匀浆
不稀释
人血浆
不稀释
10%大鼠心匀浆
不稀释
猪血清
不稀释
10%大鼠肝匀浆
40-60
大鼠血清
不稀释
10%大鼠肾匀浆
不稀释
注：样本稀释液为生理盐水(0.9% NaCl)或 PBS（0.01 M，pH 7.4）。
3.加样和检测:
①标准孔：在设置好的标准孔中，分别加入5 μL试剂一（触板底加入）（所有的操作中，板孔壁上不能挂液）。
②向标准孔中从A孔到F孔分别加入20、18、16、14、12、10 μL的试剂三。
③向标准孔中从A孔到F孔分别加入0、2、4、6、8、10 μL的试剂二，且每次吸取试剂二后，都需要将吸嘴伸入板孔液体中吸打混匀。
④样本孔：在样本对照孔、样本测定孔中加入20 μL试剂三（已预温10 min）。
⑤在样本测定孔中加入5 μL样本，并将吸嘴伸入孔底部液体中吸打混匀。将酶标板置于37℃中孵育30 min。
⑥向标准孔、样本对照孔、样本测定孔中加入20 μL试剂四。
⑦向样本对照孔中加入5 μL样本，并将吸嘴伸入板孔液体中吸打混匀。
⑧在酶标仪上振荡混匀10 s，37℃孵育20 min。
⑨向各孔中加入200 μL试剂五工作液（使用多道移液器，加入速度须一致）。
⑩在酶标仪上振荡混匀10 s，室温静置15 min，酶标仪510 nm测各孔OD值。
- 操作表
标准曲线
A
B
C
D
E
F
试剂一(μL)
5
5
5
5
5
5
试剂三(μL)
20
18
16
14
12
10
试剂二(μL)
0
2
4
6
8
10
每加一次试剂二，都需将吸嘴伸入板孔液体中吸打混匀，加完后37℃孵育30 min。
试剂四(μL)
20
20
20
20
20
20
酶标仪上震荡混匀10 s，37℃孵育20 min。
试剂五工作液(μL)
200
200
200
200
200
200
在酶标仪上振荡混匀10 s，室温静置15 min，酶标仪510 nm测各孔OD值。以标准孔绝对OD值为横坐标，0、28、57、97、150、200卡门氏单位为纵坐标，绘制二次函数曲线。
样本测定
对照孔
测定孔
37 ℃预温10 min的试剂三(μL)
20
20
待测样本(μL)
--
5
测定孔加入一个样本，都需将吸嘴伸入板孔液体中吸打混匀，加完后37℃孵育30 min。
试剂四(μL)
20
20
待测样本(μL)
5
--
对照孔每加入一个样本，都需将吸嘴伸入板孔液体中吸打混匀，加完后，酶标仪上震荡混匀10 s，37℃孵育20 min。
试剂五工作液(μL)
200
200
在酶标仪上震荡混匀10 s，室温静置15 min，酶标仪510 nm测各孔OD值。将样本绝对OD值（样本测定OD-样本对照OD值）带入曲线公式中计算。
- 结果计算
标准品拟合曲线：y = a x2 + b x + c
卡门氏单位定义：
25℃，1 mL液体，反应液总量3 mL，波长340 nm，1 cm光径，1 min内所生成的丙酮酸，使NADH氧化成NAD+而引起吸光度下降0.001为一个单位。（1卡门氏单位=0.482 IU/L，25℃）
国际单位定义：
25℃条件下，每分钟催化1 μmol NADH减少量所需的酶量为一个单位。
血清(浆)、细胞上清中ALT浓度计算公式：
ALT含量（IU/L）=[a × (ΔA510) 2 + b × ΔA510+ c]×0.482 IU/L*× f
细胞、组织中 ALT 浓度计算公式：
ALT 含量（IU/gprot）=[a × (ΔA510) 2 + b × ΔA510+ c]×0.482 IU/L*× f ÷ Cpr
注释:
y：卡门氏单位（0、28、57、97、150、200）
x：标准品OD值-空白OD值（卡门式单位为0时的OD值）
a,b,c：拟合曲线相应的常数
ΔA510：样本的绝对OD值（样本测定OD值-样本对照OD值）
*：25℃条件下，一卡门氏单位=0.482 IU/L
f：样本加入检测体系前的稀释倍数
Cpr：组织样本蛋白浓度：gprot/L
- 注意事项
1. 试剂盒仅供研究使用，如将其用于临床诊断或任何其他用途，我公司将不对因此产生的问题负责，亦不承担任何法律责任。
2. 实验前请仔细阅读说明书并调整好仪器，严格按照说明书进行实验。
3. 实验中请穿着实验服并戴乳胶手套做好防护工作。
4. 试剂盒检测范围不等同于样本中待测物的浓度范围。如果样品中待测物浓度过高或过低，请对样本做适当的稀释或浓缩。
5. 若所检样本不在说明书所列样本类型之中，建议先做预实验验证其检测有效性。
6. 最终的实验结果与试剂的有效性、实验者的相关操作以及实验环境等因素密切相关。本公司只对试剂盒本身负责，不对因使用试剂盒所造成的样本消耗负责，使用前请充分考虑样本可能的使用量，预留充足的样本。