产品
Alkaline Phosphatase (ALP) Activity Assay Kit
- 货号
K099
- 中文名称
碱性磷酸酶（ALP）比色法试剂盒
- 规格
96T(80 samples)
- 检测范围
0.13-50金氏单位/100mL
- 灵敏度
0.13金氏单位/100mL
- 试剂盒组件
编号
名称
规格（96T）
保存方式
试剂一(Reagent 1)
缓冲液(Buffer Solution)
3 mL
2-8℃，避光
试剂二(Reagent 2)
基质液(Substrate Solution)
3 mL
2-8℃，避光
试剂三(Reagent 3)
显色剂(Chromogenic Agent)
18 mL
2-8℃，避光
试剂四(Reagent 4)
0.5 mg/mL酚标准储备液(0.5 mg/mL Phenol Standard)
1.5 mL
2-8℃，避光
说明书
1 份
- 保存条件
2-8℃避光条件下保存6个月。
- 检测原理
在pH=10的反应液中，碱性磷酸酶催化磷酸苯二钠水解，生成游离酚和磷酸。酚在碱性溶液中与4-氨基安替吡啉结合，并经铁氰化钾氧化生成红色的醌的衍生物，根据红色的深浅计算酶活的高低。
本试剂盒适用于检测动物血清(浆)、体液、组织及细胞中碱性磷酸酶的活力。
本试剂盒检测组织或细胞样本时，需测定总蛋白浓度，推荐使用本公司BCA蛋白浓度测定试剂盒 (货号K001)进行测定。
- 检测步骤 (仅供参考)
1.试剂准备:
a.检测前，试剂平衡至室温。
b.工作液的配制：
按试剂一：试剂二为1: 1的体积比混匀，现用现配，未用完的工作液2-8℃避光可保存1天。
c.不同浓度标准品的稀释：
编号
①
②
③
④
⑤
⑥
⑦
⑧
标准品浓度(mg/mL)
0
0.025
0.05
0.1
0.2
0.3
0.4
0.5
0.5 mg/mL标准品（μL）
0
5
10
20
40
60
80
100
双蒸水(μL)
100
95
90
80
60
40
20
0
2.样品的制备:
a.样本处理
血清(浆)等液体样本：直接测定。
组织样本：组织处理的匀浆介质为生理盐水（0.9% NaCl）或PBS（0.01 M，pH 7.4）。匀浆后，4℃，10000 × g离心10 min，取上清置于冰上待测。留取部分上清用于蛋白浓度测定。
细胞样本：取约106 个细胞加入300-500 μL生理盐水（0.9% NaCl）或PBS（0.01 M，pH 7.4）匀浆。匀浆后，4℃，10000 × g离心10 min，取上清置于冰上待测。留取部分上清用于蛋白浓度测定。
b.样本的稀释
在正式检测前，需选择2-3个预期差异大的样本稀释成不同浓度进行预实验，不同样本的稀释如下表（仅供参考）:
样本
稀释倍数
样本
稀释倍数
人血清
不稀释
10%小鼠肾匀浆
30-50
人尿液
不稀释
10%小鼠肝匀浆
不稀释
大鼠血清
不稀释
HepG2 细胞
不稀释
细胞上清
不稀释
10%小鼠脑匀浆
不稀释
注：稀释液为生理盐水（0.9% NaCl）或 PBS（0.01 M，pH 7.4）。
3.加样和检测:
① 标准孔：取5 μL不同浓度的标准品加入到酶标板孔中；
测定孔：取5 μL待测样本加入到酶标板孔中；
② 向步骤①中标准孔、测定孔加入50 μL工作液。
③ 酶标仪振板30 s，37℃孵育15 min。
④ 向步骤③中标准孔、测定孔加入150 μL试剂三。
⑤ 混匀，酶标仪520 nm测OD值。
- 操作表
标准孔
测定孔
不同浓度的标准品（μL）
5
--
待测样本（μL）
--
5
工作液（μL）
50
50
酶标仪振板30 s，37℃孵育15 min
试剂三（μL）
150
150
混匀，酶标仪520 nm处，测各孔OD值
- 结果计算
标准品拟合曲线：y = ax + b
血清（浆）等液体样本中ALP活力计算：
定义：100 mL血清在37℃与基质作用15 min产生1 mg酚为1个金式单位。
组织、细胞中ALP活力计算：
定义：每克组织或细胞蛋白在37℃与基质作用15 min产生1 mg酚为1个金式单位。
注释:
ΔA：测定孔OD值-空白OD值（标准品浓度为0时的OD值）
V1：单位定义中血清体积（100 mL）
f：样本加入检测体系前的稀释倍数
Cpr：待测样本的蛋白浓度（gprot/mL）
- 注意事项
1. 试剂盒仅供研究使用，如将其用于临床诊断或任何其他用途，我公司将不对因此产生的问题负责，亦不承担任何法律责任。
2.实验前请仔细阅读说明书并调整好仪器，严格按照说明书进行实验。
3.实验中请穿着实验服并戴乳胶手套做好防护工作。
4.试剂盒检测范围不等同于样本中待测物的浓度范围。如果样品中待测物浓度过高或过低，请对样本做适当的稀释或浓缩。
5.若所检样本不在说明书所列样本类型之中，建议先做预实验验证其检测有效性。
6.最终的实验结果与试剂的有效性、实验者的相关操作以及实验环境等因素密切相关。本公司只对试剂盒本身负责，不对因使用试剂盒所造成的样本消耗负责，使用前请充分考虑样本可能的使用量，预留充足的样本。