产品
Creatine Kinase (CK) Activity Assay Kit
- 货号
K118
- 中文名称
肌酸激酶（CK）比色法测试盒
- 规格
48T(46S)/ 96T(94S)
- 检测范围
13.55-115.86 U/L
- 灵敏度
6.16 U/L
- 试剂盒组件
编号
名称
规格（48T）
规格（96T）
保存方式
试剂一
(Reagent 1)
酶溶液(Enzyme Solution)
14 mL
28 mL
2-8℃，避光
试剂二
(Reagent 2)
酸溶液(Acid Solution)
4 mL
8 mL
2-8℃，避光
说明书
1 份
- 保存条件
2-8℃避光条件下保存3个月。
- 检测原理
磷酸肌酸激酶（CK，EC 2.7.3.2）催化磷酸肌酸和 ADP 生成肌酸和 ATP，己糖激酶（HK，Hexokinase）催化肌酸与葡萄糖形成 6-磷酸葡萄糖，6-磷酸葡萄糖脱氢酶（G6P-DH，Glucose-6-phosphate dehydrogenase）催化 6-磷酸葡萄糖与 NADP+生成 NADPH，引起 340 nm 波长处吸光值增加。
本试剂盒适用于检测血清(浆)、体液、组织及细胞中肌酸激酶的活力。
本试剂盒检测组织或细胞样本时，需测定总蛋白浓度，推荐使用本公司BCA蛋白浓度测定试剂盒 (货号K001)进行测定。
- 检测步骤 (仅供参考)
1.试剂准备:
检测前，试剂平衡至室温。试剂二需要在37℃恒温箱中孵育10min。
2.样品的制备:
a.样本处理
血清(浆)等液体样本：直接测定。
组织样本：称取0.02g组织样本，加入0.18mL PBS（0.01 M，pH 7.4）。匀浆后，4℃，10000 × g离心10 min，取上清置于冰上待测。留取部分上清用于蛋白浓度测定。
细胞样本：取约10^6个细胞加入200μl PBS（0.01 M，pH 7.4）匀浆。匀浆后，4℃，10000 × g离心10 min，取上清置于冰上待测。留取部分上清用于蛋白浓度测定。
b.样本的稀释
在正式检测前，需选择2-3个预期差异大的样本稀释成不同浓度进行预实验，不同样本的稀释如下表（仅供参考）:
样本
稀释倍数
样本
稀释倍数
人血清
不稀释
10%大鼠肾匀浆
不稀释
人血浆
不稀释
10%大鼠肝匀浆
2-10倍
小鼠血清
不稀释
HepG2 细胞
不稀释
大鼠血清
不稀释
10%大鼠脑匀浆
2-5倍
注：稀释液为PBS（0.01 M，pH 7.4）。
3.加样和检测:
① 空白孔：取10μL双蒸水加入到酶标板孔中；
测定孔：取10 μL待测样本加入到酶标板孔中；
② 向步骤①中各孔加入200 μL试剂一。
③ 充分混匀，37℃孵育5 min。
④ 向步骤③中各孔加入20 μL温育10min的试剂二。
⑤ 混匀，37℃孵育2 min，酶标仪340 nm测OD值为A1。37°孵育5min后测定OD值为A2，△A = A2 - A1。
- 操作表
空白孔
测定孔
双蒸水（μL）
10
--
待测样本（μL）
--
10
试剂一（μL）
200
200
充分混匀，37℃孵育5 min
试剂二（μL）
20
20
混匀，37℃孵育2 min，酶标仪340 nm测OD值为A1。37°孵育5min后测定OD值为A2，△A = A2 - A1。
- 结果计算
血清（浆）等液体样本中CK活力计算：
定义：37°C 条件下，每升血清（浆）每分钟使反应体系中底物 NADPH的浓度改变 1 μmol 所需的酶量为 1 个酶活力单位。
组织、细胞中CK活力计算：
定义：37°C 条件下，每克组织或细胞蛋白每分钟使反应体系中底物NADPH 的浓度改变 1 μmol 所需的酶量为 1 个酶活力单位。
注释:
ΔA：A2 - A1
t：样本在 37°C 下反应的时间，5 min
0.6：酶标板孔的光径，0.6 cm
ε：NADPH 在 340 nm 处的微摩尔吸光系数，6.22×10-3 L/(μmol•cm)
V 总：反应液的总体积，0.23 mL
V 样：样本体积，0.01 mL
f：样本检测前稀释的倍数
Cpr：待测样本的蛋白浓度，gprot/L
- 注意事项
1. 试剂盒仅供研究使用，如将其用于临床诊断或任何其他用途，我公司将不对因此产生的问题负责，亦不承担任何法律责任。
2.实验前请仔细阅读说明书并调整好仪器，严格按照说明书进行实验。
3.实验中请穿着实验服并戴乳胶手套做好防护工作。
4.试剂盒检测范围不等同于样本中待测物的浓度范围。如果样品中待测物浓度过高或过低，请对样本做适当的稀释或浓缩。
5.若所检样本不在说明书所列样本类型之中，建议先做预实验验证其检测有效性。
6.最终的实验结果与试剂的有效性、实验者的相关操作以及实验环境等因素密切相关。本公司只对试剂盒本身负责，不对因使用试剂盒所造成的样本消耗负责，使用前请充分考虑样本可能的使用量，预留充足的样本。