产品
Protein Carbonyl Colorimetric Assay Kit (for Tissue and Serum Samples)
蛋白质羰基含量比色法测试盒（测血清和组织）- 货号
K119
- 中文名称
蛋白质羰基含量比色法测试盒(测血清、组织)
- 规格
48T(24S)/ 96T(48S)
- 试剂盒组件
编号
名称
规格（48T）
规格（96T）
保存方式
试剂一(Reagent 1)
匀浆介质(Homogenate Medium)
50 mL×1 瓶
50 mL×2 瓶
2-8℃
试剂二(Reagent 2)
硫酸盐(Sulfates)
粉剂×1 支
粉剂×2 支
2-8℃，避光保存
试剂三(Reagent 3)
DNPH试剂(DNPH Solution)
10 mL×1 瓶
20 mL×1 瓶
2-8℃，避光保存
试剂四(Reagent 4)
酸试剂(Acid Reagent)
10 mL×1 瓶
20 mL×1 瓶
2-8℃
试剂五(Reagent 5)
蛋白沉淀剂(Protein Precipitator)
30 mL×1 瓶
60 mL×1 瓶
2-8℃
试剂六(Reagent 6)
变性剂(Denaturant)
37.5 mL×2 瓶
50 mL×3 瓶
2-8℃
- 保存条件
2-8℃避光条件下保存6个月。
- 检测原理
被氧化后的蛋白质羰基含量增多，羰基可与2,4-二硝基苯肼反应生成一种红棕色沉淀，如图，将沉淀溶解后可在分光光度计上读取370 nm下的吸光度值，从而计算出蛋白质的羰基含量。
本试剂盒检测样本时，需测定蛋白浓度，推荐使用本公司BCA蛋白浓度测定试剂盒 (货号K001)进行测定。
本试剂盒适用于检测血清、血浆、胸水、细胞上清、组织样本中蛋白质羰基的含量。
- 需自备试剂和器材
酶标仪(360-385 nm)、台式离心机、恒温水浴/培养箱、96孔板、精密微量移液器和干净的一次性枪头、干净的EP管、无水乙醇、乙酸乙酯、双蒸水
- 检测步骤 (仅供参考)
1.试剂准备
①检测前，试剂盒中的试剂平衡至室温。酸试剂使用前应在37°C孵育10min。
②试剂二应用液的配制：取一支试剂二用3 mL双蒸水溶解即可，2-8°C避光可保存3天。
③无水乙醇与乙酸乙酯混合应用液的配制：按无水乙醇：乙酸乙酯为1: 1比例混合，现用现配。
2.样品的制备
a.样本处理
血清(浆)等液体样本：直接测定。
组织样本：
①收集每次测定所需的组织量（最初建议20毫克）。
②用冷的PBS (0.01 M, pH 7.4)清洗组织样本。
③向20mg组织中加入180 µL试剂一，4℃匀浆。
④在4℃，10000×g离心10min，收集上清液置冰上待测。
⑤同时测定上清液的蛋白浓度 (K001)。
b.样本的稀释
本试剂盒要求待测样本的蛋白含量在1-10mg /mL之间。在正式检测前，需选择2-3个预期差异大的样本稀释成不同浓度进行预实验。不同样本的推荐稀释倍数如下（仅供参考）：
样本
稀释倍数
人血清
8-10
母乳
1
人尿液
1
大鼠血清
8-10
10%大鼠肾组织匀浆
2-3
10%小鼠脑组织匀浆
1
10%小鼠心脏组织匀浆
1
注：稀释液是双蒸水或试剂一
3.加样和检测
血清、血浆、胸水、细胞上清：直接测定蛋白质羰基含量即可。
组织样本：取组织匀浆0.45 mL，加0.05 mL试剂二应用液(即9: 1比例)，室温放置10 min，4°C，11580 ×g 离心10 min，取上清液进行蛋白质羰基含量测定。
(1)对照管：取0.1 mL待测样本、0.4 mL试剂四加入到2 mL EP管中；
测定管：取0.1 mL待测样本、0.4 mL试剂三加入到2 mL EP管中。
(2)涡旋混匀1 min，37°C准确避光反应30 min。
(3)向各管加入0.5 mL试剂五，涡旋混匀1 min，4°C，13780 × g 离心10 min。
(4)用移液枪取出上清液丢弃，留沉淀。
(5)向各管加1 mL无水乙醇与乙酸乙酯混合应用液，涡旋混匀1 min，4°C，13780 ×g 离心10 min，用移液枪取出上清液丢弃，留沉淀。(涡旋混匀不能少于1 min)。
(6)重复步骤(5)3次(若沉淀物还有黄色残留，则适当增加无水乙醇与乙酸乙酯混合应用液的洗涤次数)。
(7)洗涤完毕后的各管加入1.25 mL试剂六，涡旋混匀，37°C反应15 min。
(8)涡旋混匀使沉淀溶解，4°C，13780 ×g，离心15 min。
(9)用微量移液器取上清液0.3 mL到酶标板，酶标仪上测定370 nm处的OD值；同时取测定管上清液，用BCA法测其蛋白浓度。
- 结果计算
注释:
A1：测定管OD值
A2：对照管OD值
ε：羰基摩尔消光系数，22000 L/mol/cm
d：比色光径(0.8 cm)
V1：反应体系总体积(1.25 mL)
V2：加入反应体系中待测样本体积(0.1 mL)
Cpr：测定管上清液的蛋白浓度(mgprot/mL)
f：样本加入检测体系之前的稀释倍数
- 注意事项
1. 试剂盒仅供研究使用，如将其用于临床诊断或任何其他用途，我公司将不对因此产生的问题负责，亦不承担任何法律责任。
2. 实验前请仔细阅读说明书并调整好仪器，严格按照说明书进行实验。
3. 实验中请穿着实验服并戴乳胶手套做好防护工作。
4. 试剂盒检测范围不等同于样本中待测物的浓度范围。如果样品中待测物浓度过高或过低，请对样本做适当的稀释或浓缩。
5. 若所检样本不在说明书所列样本类型之中，建议先做预实验验证其检测有效性。
6. 最终的实验结果与试剂的有效性、实验者的相关操作以及实验环境等因素密切相关。本公司只对试剂盒本身负责，不对因使用试剂盒所造成的样本消耗负责，使用前请充分考虑样本可能的使用量，预留充足的样本。