产品
Protein Carbonyl Colorimetric Assay Kit
- 货号
K120
- 中文名称
蛋白质羰基含量比色法测试盒
- 规格
48T(48S)/ 96T(96S)
- 试剂盒组件
编号
名称
规格（48T）
规格（96T）
保存方式
试剂一(Reagent 1)
Extraction Buffer
50 mL
100 mL
2-8℃
试剂二(Reagent 2)
Antioxidant
粉剂×1 支
粉剂×1 支
2-8℃，避光保存
试剂三(Reagent 3)
Chromogen
6 mL
12 mL
2-8℃，避光保存
试剂四(Reagent 4)
HCl
6 mL
12 mL
2-8℃
试剂五(Reagent 5)
TCA
15 mL
30 mL
2-8℃
试剂六(Reagent 6)
Guanidine Hydrochloride
30 mL
60 mL
2-8℃
- 保存条件
2-8℃避光条件下保存12个月。
- 检测原理
被氧化后的蛋白质羰基含量增多，羰基可与2,4-二硝基苯肼反应生成一种红棕色沉淀，如图，将沉淀溶解后可在分光光度计上读取370 nm下的吸光度值，从而计算出蛋白质的羰基含量。
本试剂盒检测样本时，需测定蛋白浓度，推荐使用本公司BCA蛋白浓度测定试剂盒 (货号K001)进行测定。
本试剂盒适用于检测血清、血浆、动植物组织、细胞、细菌样本中蛋白质羰基的含量。
- 需自备试剂和器材
酶标仪(360-385 nm)、台式离心机、恒温水浴/培养箱、96孔板、精密微量移液器和干净的一次性枪头、干净的EP管、去离子水、无水乙醇、乙酸乙酯
- 检测步骤 (仅供参考)
1.试剂准备
Extraction Buffer：即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。
Working Antioxidant：临用前配制；称取0.1 g加1 mL去离子水溶解配制，每1 mL为10个样品用量；4℃避光保存。
Chromogen：即用型；使用前，平衡到室温；4℃避光保存。
HCl：即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。
TCA：即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。
Guanidine Hydrochloride：即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。
2.样品的制备
a.样本处理
血清（浆）：直接测定。
动植物组织：称取约0.1 g样本，加入1 mL Extraction Buffer，冰浴匀浆，4,000 g，4℃离心10 min，取上清液，加0.1 mL Working Antioxidant，室温放置10 min，4℃，10,000 g 离心10 min，取上清液，置冰上待测。
细胞或细菌：收集500万细胞或细菌到离心管内，用冷PBS清洗细胞，离心后弃上清，加入1 mL Extraction Buffer，冰浴超声波破碎细胞或细菌5 min（功率20%或200 W，超声3 s，间隔7 s，重复30次），然后10,000 g，4℃离心10 min，取上清液，置冰上待测。
3.加样和检测
(1)酶标仪或紫外分光光度计预热30 min以上，调节波长到370 nm，紫外分光光度计用去离子水调零。
(2)按照下表进行加样及反应：
试剂
对照管（μL）
测定管（μL）
Sample
60
60
Chromogen
0
120
HCl
120
0
混匀，37℃避光反应1 h
TCA
150
150
静置5 min，4℃，12,000 g 离心15 min，弃上清，留沉淀
无水乙醇
150
150
乙酸乙酯
150
150
漩涡混匀，4℃，12,000 g 离心10 min，弃上清，留沉淀，重复3次
Guanidine Hydrochloride
300
300
漩涡混匀，37℃温育15 min，沉淀全部溶解后，4℃，12,000 g离心15 min，取上清200 μL于96孔UV板或微量石英比色皿中，370 nm处测定吸光值，计算ΔA=A测定-A对照。
- 结果计算
注意：我们为您提供的计算公式，包括推导过程计算公式和简洁计算公式。两者完全相等。建议以加粗的简洁计算公式为最终计算公式。
A. 使用96孔UV板测定的计算公式
1. 按照样本蛋白浓度计算
蛋白质羰基含量(μmol/mg prot)=[ΔA×V反总÷(ε×d)]÷(V样×Cpr)=0.454×ΔA÷Cpr
2. 按照样本重量计算
蛋白质羰基含量(μmol/g 鲜重)=[ΔA×V反总÷(ε×d)]÷(W×V样÷V样总)=0.454×ΔA÷W
3. 按照细胞或细菌数量计算
蛋白质羰基含量(μmol/10 4 )=[ΔA×V反总÷(ε×d)]÷(500×V样÷V样总)=0.454×ΔA÷500
4. 按照液体体积计算
蛋白质羰基含量(μmol/mL)=[ΔA×V反总÷(ε×d)]÷V样=0.454×ΔA
ΔA=A测定-A对照；V反总：反应体系总体积，0.3 mL；ε：羰基摩尔消光系数，22 L/mmol/cm；d：96 孔板光径，0.5 cm；V样：加入样本体积，0.06 mL；V样总：加入 Extraction Buffer 体积，1 mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL，W：样本质量，g；500：细胞或细菌数量，5×10 6。
B. 使用微量石英比色皿测定的计算公式
将上述计算公式中的光径d:0.5 cm调整为d:1 cm进行计算即可。
注：如果计算方法基于样品蛋白浓度，推荐使用本公司BCA蛋白浓度测定试剂盒 (货号K001)进行测定。
- 注意事项
1. 试剂盒仅供研究使用，如将其用于临床诊断或任何其他用途，我公司将不对因此产生的问题负责，亦不承担任何法律责任。
2. 实验前请仔细阅读说明书并调整好仪器，严格按照说明书进行实验。
3. 实验中请穿着实验服并戴乳胶手套做好防护工作。
4. 试剂盒检测范围不等同于样本中待测物的浓度范围。如果样品中待测物浓度过高或过低，请对样本做适当的稀释或浓缩。
5. 若所检样本不在说明书所列样本类型之中，建议先做预实验验证其检测有效性。
6. 最终的实验结果与试剂的有效性、实验者的相关操作以及实验环境等因素密切相关。本公司只对试剂盒本身负责，不对因使用试剂盒所造成的样本消耗负责，使用前请充分考虑样本可能的使用量，预留充足的样本。