rProtein A Agarose beads

K126

rProtein A 亲和层析介质

10mL/50mL/100mL

2-8℃条件下保存24个月。

蛋白A源自金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus），其分子包含5个Fc结合域，可特异性结合IgG抗体的Fc区。作为亲和配体，蛋白A通过偶联至琼脂糖凝胶（Sepharose）基质，使结合域充分暴露，确保与IgG的高效结合。单个蛋白A分子至少可同时结合2个IgG分子。

蛋白A对IgG的结合强度因抗体来源物种及IgG亚型而异（参见表1）。动态结合容量（dynamic binding capacity） 不仅受结合强度影响，还取决于上样流速等其他因素。除IgG外，蛋白A还可与以下免疫球蛋白结合：人类初乳IgA（colostral IgA）；人类骨髓瘤IgA2（但不结合IgA1）；部分人类单克隆IgM及巨球蛋白血症血清中的IgM。

亲和层析介质中的配体脱落（ligand leakage）始终存在可能，尤其是在苛刻的洗脱条件（harsh elution conditions）下。然而，Protein A 与Sepharose的 多点偶联（multi-point attachment） 设计，使其在多种洗脱条件下均保持极低的脱落水平。

Table 1. Binding characteristics of different immunoglobulins (Ig).

*Native Protein A and protein A differ in their binding to Ig classes from different species and subclasses. S：strong binding；M：medium binding；W：weak binding；N：no binding.

注意：鉴于本品对不同种属、亚型的抗体具有不同程度的亲和性，保持不同抗体生物活性的所需

缓冲条件不同，建议用户进行方法筛选。以下提供一种参考工艺：

平衡：使用5-10CV 的bufferA (20 mM PB+0.15M NaCl，pH7.0；或0.05M 硼酸，4.0M NaCl，pH9.0)进行柱子平衡(平衡至基线)。

上样：上样适量样品(固体样品请使用buffer A配制，液体样品可使用buffer A进行透析)。

洗涤：使用5CV的buffer A洗涤柱子(淋洗至基线)。

洗脱：使用buffer B (20 mM柠檬酸，pH3.0；或0.1 M甘氨酸，pH3.0；或20 mM乙酸钠，pH3.0)进行10CV线性洗脱，直至100% buffer B。

中和：收集洗脱产物，使用中和缓冲液(1.0MTris-HCl，pH9.0或其它)将抗体稀释至稳定pH值。

再生：在进行一定次数的使用后，需要对柱子进行再生、原位清洗，以下提供两种方法：

(1)用0.1 M的乙酸或0.1 M的乙酸/20%乙醇淋洗柱子3-5 CV，然后用缓冲液洗到中性即可重复使用；

(2)也可用01-0.5 M NaOH淋洗柱子3-5CV，并用3-10CV的纯水冲洗，然后用缓冲液洗到中性即可重复