- 货号
K150
- 中文名称
谷氨酸（Glu）含量比色法检测试剂盒
- 规格
50T/48S
- 试剂盒组件
|
成份
|
数量
|
使用方法
|
储存方式
|
|
标准品
|
1 mL×1 支
|
10μmol/mL 谷氨酸标准品
|
2-8℃ 保存3个月
|
|
试剂一
|
120mL×1 瓶
|
|
2-8℃ 保存3个月
|
|
试剂二
|
5mL×1 瓶
|
|
2-8℃ 保存3个月
|
|
试剂三
|
粉剂×1 瓶
|
使用前加入55mL试剂一
|
-20℃ 保存3个月
|
|
试剂四
|
粉剂×1 瓶
|
使用前加入4mL试剂二
|
-20℃ 保存3个月
|
|
试剂五
|
粉剂×1 瓶
|
使用前加入3.5mL试剂四
|
-20℃ 保存3个月
|
- 需自备试剂和器材
紫外分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1 mL 石英比色皿、研钵/匀浆器、冰、蒸馏水。
- 检测原理
谷氨酸（Glu）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，不仅是组成蛋白质的 20 种氨基酸之一，而且通过转氨基作用参与多种氨基酸合成，是生物体内主要氨基来源之一。此外，Glu 还是味精的主要有效成分，常用做食品添加剂以及香料生产。谷氨酸脱氢酶（GDH）催化谷氨酸和 NAD 生成α-酮戊二酸、NADH和NH4+，引起340nm处吸光度的上升，通过测定340nm吸光度的变化，计算谷氨酸含量。
- 用途
本试剂盒适用于检测血清、血浆、动物组织、细胞及细胞上清中谷氨酸的含量。
- 检测步骤 (仅供参考)
1.样本处理：
a. 细胞/细菌按照细胞数量（106个）：试剂一体积（mL）为5~1：1的比例（建议5百万细胞/细菌加入1 mL 试剂一），冰浴超声波破碎细胞/细菌（功率200w，超声3秒，间隔10秒，总时间3min）；10000 rpm，4℃离心10min，取上清置冰上待测。
b. 组织：按照质量（g）：试剂一体积（mL）为1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g，加入 1mL 试剂一）加入试剂一，冰浴匀浆后，10000rpm，4℃离心 10min，取上清置冰上待测。
c. 血清等液体：取0.5mL 液体样本加入0.5 mL试剂一充分震荡混匀，10000rpm，4℃离心 10min，取上清置冰上待测。
2.准备工作：
正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。
a. 紫外分光光度计预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。
b. 临用前根据样本量取部分试剂三置于37℃预热5min以上。
c. 标准品的稀释：将10 μmol/mL 谷氨酸标准品用蒸馏水分别稀释为0.8、0.6、0.4、0.2、0.1、0.05μmol/mL 的标准品备用。
3.按操作表依次加入各试剂
|
试剂名称（µL）
|
测定管
|
标准管
|
空白管
|
|
样本
|
200
|
-
|
-
|
|
标准品
|
-
|
200
|
-
|
|
蒸馏水
|
-
|
-
|
200
|
|
试剂三
|
800
|
800
|
800
|
|
充分混匀，测定 340nm 下吸光度 A1，分别记为 A1 测定、A1 标准和 A1 空白
|
|
试剂五
|
50
|
50
|
50
|
|
充分混匀，然后迅速置于37℃准确反应30min，立即测定 30min10s 时的吸光度A2，分别记为A2 测定、A2 标准、A2 空白。计算ΔA 标准=A2标准-A1标准，ΔA测定=A2测定-A1测定。标准曲线和空白管只需测 1-2 次。
4.结果计算
a. 标准曲线的绘制：
根据标准管的浓度（x，μmol/mL）和吸光度ΔA标准（y，ΔA标准），建立标准曲线。根据标准曲线，将ΔA测定（y，ΔA 测定）带入公式计算样本浓度（x，μmol/mL）。
b. 谷氨酸（Glu）含量计算：
（1） 按照蛋白浓度计算：Glu 含量（µmol/mg prot）= x×V 样本÷（Cpr×V 样本）×F=x÷Cpr×F
（2） 按照样本质量计算：Glu 含量（µmol/g 质量）= x×V 样本÷（W÷V 提取×V 样本）×F =x÷W×F
（3） 按照细菌或细胞数量计算：Glu 含量（μmol/106 cell）= x×V 样本÷（N÷V 提取×V 样本）×F = x÷N×F
（4） 按照液体样本体积计算：Glu 含量（μmol/mL）= x×2×F = 2x×F
V 提取：前处理加入试剂一的体积，1mL；
V 样本：加入的样本体积，0.2mL；
Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；
W：样本质量，g；
N：细菌或细胞总数，以106计；
2：液体样本前处理的稀释倍数，（0.5mL 液体样本+0.5mL 试剂一）÷0.5mL 液体样本=2；F：样本稀释倍数。
|
- 注意事项
1、如果测定吸光值超过线性范围吸光值，可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定。
2、最低检出限：0.023 µmol/mL
3、线性范围：0.05-0.8 µmol/mL
