Bcl-2（B细胞淋巴瘤2）WB实验成功3大因素

Bcl-2（B细胞淋巴瘤2）是一种关键的抗凋亡蛋白，能够抑制细胞凋亡，维持细胞存活。1984年，Tsujimoto等人在研究B细胞淋巴瘤时发现，Bcl-2基因通过t(14;18)染色体易位过度表达，从而增强细胞对凋亡的抵抗。Bcl-2的过表达与多种肿瘤的发生、发展及治疗抵抗密切相关，成为癌症研究中的重要靶点。其在肿瘤细胞中的作用使得Bcl-2成为癌症治疗中的潜在目标。

细胞凋亡是程序化的细胞死亡过程，是维持机体稳态的关键机制。Bcl-2家族包括20多种蛋白，分为抗细胞凋亡和促细胞凋亡两类。抗细胞凋亡蛋白（如Bcl-2、Bcl-xl）可进一步细分为促凋亡效应因子（如Bax、Bak）和BH3-only蛋白（如Bim、Bad、Bid），后者通过直接激活Bax和Bak或抑制抗凋亡蛋白来促进凋亡。最终，Bax和Bak形成寡聚体，导致线粒体外膜透化，释放细胞色素c，引发细胞凋亡。

BCL-2 WB实验

WB实验成功与否的关键因素主要有以下三点：

① 蛋白样本的制备：

蛋白样本的成功制备是WB实验的关键，必须确保目标蛋白完整、丰度高且抗原表位充分暴露。如果目的蛋白在样本中表达极低甚至不表达，将难以检测到条带。实验前应查阅数据库如BioGPS或Protein Atlas，了解目标蛋白的表达情况。如BCL-2蛋白仅在少数细胞系中高表达，对于低表达样本可通过过表达或诱导手段提高其表达，再进行WB检测。

② WB 实验步骤的优化：

WB是常规而重要的实验，许多同学已较为熟练掌握其原理和流程。这里整理并分享CST科学家优化的实验步骤，供大家在使用抗体时参考和调整：

1）转膜：建议在4℃下湿转，恒压70V，30分钟至3小时。小分子蛋白可缩短转膜时间并选用0.22 µm膜，大分子蛋白则延长至3小时，转膜液中可添加0.1% SDS，降低甲醇浓度至5%-10%。

2）封闭：使用5%脱脂奶粉/TBST，在室温下封闭1小时。相比BSA，脱脂奶粉通常封闭效果更佳。

3）洗膜：用1×TBST清洗，每次5分钟，共洗3次。

4）抗体稀释：一抗按照说明书推荐比例稀释，二抗用5%脱脂奶粉/TBST稀释即可。

③ 合适抗体的选择与使用：

选择抗体时需关注多个细节。首先确认抗体是否经过WB验证，并优先选择有文献支持的产品。查看抗体的宿主种属，确保与二抗匹配；同时关注免疫原区域（如N端、C端或全长），应与目标蛋白的表位一致。还要根据样本中目标蛋白的表达水平选择高特异性或高灵敏度的抗体。可通过Protein Atlas、CiteAb等数据库辅助判断。

世上道理千千万，每个人理解和领悟不同，实践起来自然也千差万别，最终走出各异的人生。同样地，WB实验中由于不同蛋白的表达丰度及抗体识别的抗原表位各不相同，蛋白的制备方式及WB流程的细节就决定了实验能否成功。菲恩生物拥有十余年实验经验与专业技术团队，致力于为您的Bcl-2相关研究提供高质量支持，助力科研高效开展。

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