流式实验秘籍：解锁常用5种对照实验类型

在流式细胞术实验中，对照是至关重要的，没有合适的对照无法获得准确可靠的结果。首先，信号（如散射光和荧光信号）是相对的，因此需要空白对照或未染色对照来定义信号范围。其次，在设定目的细胞群的门时，各种对照帮助确定门的位置。最后，对照还可以用来评估实验操作的有效性。常用的流式实验对照主要包括空白对照、未染色对照、阳性对照和阴性对照等。

1.空白对照

在流式细胞术中，背景荧光或自发荧光通常用于区分细胞类型，并帮助调节仪器的电压或增益，从而确定阴性细胞群的大致位置。然而，在多色实验中，这些对照一般不用于精确界定阴阳性细胞群的界限。相反，研究人员通常依赖于更精确的阳性和阴性对照，以确保准确划分不同细胞群体。合理使用这些对照对于获得可靠的实验结果至关重要。

2.补偿（单染）对照

补偿对照主要用于调节荧光补偿。在全染样品中，使用的荧光染料数量决定了需要设置的单染对照管数量。补偿对照可以使用细胞或微球，具体原则可参考之前关于荧光补偿的说明。例如，若样品使用FITC和PE双染，则需要准备FITC单染管、PE单染管和未染色对照管，以确保准确的补偿设置。这样可以有效减少荧光信号重叠带来的干扰，提高实验结果的准确性。

3.FMO (fluorescence minus one)对照

设置合理的对照组是确保流式实验成功的关键，可以有效避免假阳性和假阴性结果。流式实验中应至少包括五种对照：空白对照、同型对照、单染对照、荧光减一对照和生物学对照。这些对照有助于校准仪器、评估背景信号、确定补偿值以及验证实验设计的合理性，从而提高数据的准确性和可靠性。通过精心设置这些对照组，您可以确保实验结果的真实性和可重复性。

4.同型(isotype)对照

同型对照是指与使用的流式抗体具有相同种属来源、亚型和荧光标记物，但对目标靶点不具特异性结合的抗体（无关Fab片段）。在单核细胞、树突状细胞和巨噬细胞等表面表达Fc受体的细胞类型中，可能会发生与抗体Fc段及某些荧光染料的非特异性结合。因此，同型对照常用于排除非特异性染色。然而，在多色实验中，设定门的界限时通常不使用同型对照，而是依赖FMO对照。

5.生物学对照

设置合理的对照组是确保流式实验成功的关键，可以有效避免假阳性和假阴性结果。流式实验中应至少包括五种对照：空白对照、同型对照、单染对照、荧光减一对照和生物学对照。这些对照有助于校准仪器、评估背景信号、确定补偿值以及验证实验设计的合理性，从而提高数据的准确性和可靠性。通过精心设置这些对照组，您可以确保实验结果的真实性和可重复性。

在流式实验中，空白对照和单阳对照用于调节电压和补偿，而后面几种对照主要帮助圈门以区分阴阳性细胞群。具体需要哪些对照取决于实验类型，例如细胞凋亡实验通常需空白对照、单染对照及生物学对照。菲恩生物利用先进的单克隆抗体平台，提供高亲和力和特异性的对照抗体及流式抗体配色方案，为您的科研提供可靠支持。

以下是推荐的流式抗体配方方案，用于检测不同免疫细胞亚群