在流式细胞实验中，细胞需被处理为单细胞悬液，之后可进行表面标记染色，或经过固定和通透处理后进行细胞内靶标染色，以便进行分析或分选。缓冲液在样品制备中至关重要，它能保护抗原表位，确保抗体结合靶标，并减少背景信号的干扰。因此，选择合适的缓冲液对于实验结果的准确性和可靠性至关重要，且需要根据具体实验要求进行优化。
1.染色缓冲液(staining buffer)
染色缓冲液通常基于磷酸盐缓冲液（PBS），且为了防止细胞聚集，PBS中通常不含钙（Ca²⁺）和镁（Mg²⁺）离子。缓冲液中常添加0.1-1%的牛血清白蛋白（BSA）或1-10%的胎牛血清（FBS），以封闭非特异性结合位点，减少抗体或荧光染料的非特异性结合。商品化的染色缓冲液还常含0.1-1%的叠氮化钠（NaN₃）作为防腐剂。此外，染色缓冲液也可用于抗体稀释和染色过程中的洗涤。
2.分选缓冲液(cell sorting buffer)
分选上样缓冲液通常使用不含钙镁离子的1xPBS或HBSS，并添加1-5% FBS或0.1-1%的BSA，血清浓度不宜过高，以免影响分选效果。避免使用含酚红的培养基，因为酚红可能干扰分选。缓冲液中可加入25mM HEPES以维持pH稳定，对于易粘连细胞，添加2-5mM EDTA防止聚集；若死细胞较多，可添加25-50µg/ml DNAse及1-5mM MgCl₂。细胞收集液可使用添加血清的培养基或1xPBS/ HBSS（加FBS/BSA），并可加入抗生素防止污染。
3.红细胞裂解缓冲液(RBC lysis buffer)
全血和组织匀浆样本中常常含有大量红细胞，这些红细胞会影响目标细胞的收集和检测。因此，在制备单细胞悬液时，如外周血或小鼠脾脏样本，通常使用红细胞裂解缓冲液去除红细胞，再进行后续染色和检测。红细胞裂解液的主要成分是氯化铵，利用渗透压差原理裂解红细胞。市售红细胞裂解液通常为1x或10x工作液，使用时根据说明书进行适当稀释即可。
4.固定和通透缓冲液(fixation and Permeabilization buffer)
固定和通透缓冲液用于细胞内抗原染色，目的是固定细胞结构并使细胞膜通透，以便抗体进入细胞结合目标抗原。固定步骤通常使用1-4%的甲醛（溶于PBS）在室温下孵育10-15分钟，以保持细胞形态和抗原的完整性，并锁定细胞内蛋白质结构。接着，使用合适的通透液处理细胞，常见的通透剂有Triton X-100和皂苷等，它们能够使细胞膜通透，允许抗体或染料进入细胞内。选择合适的通透剂需参考实验需求和商品说明。
目前市面上有2种固定破膜试剂盒，分别是检测细胞内因子（货号K082R）和细胞核内因子的试剂盒(货号K081)。下面2个案例结果分别是K082R和K081的展示结果。
小鼠脾脏TH1细胞检测
TIPS：
1）CD3/CD4分群明显，一般可以不用同型对照。IFN-γ检测需要同型对照。
2）PMA刺激会导致CD4+T细胞表位内吞，克隆号为RM4-5的CD4抗体可以通过检测破膜后CD4表位，来克服CD4表位内吞的影响，让CD4细胞分群清楚。
3）IFN-γ是细胞因子需要阻断后固定破膜进行检测。
小鼠脾脏Treg细胞检测
TIPS：
1）CD4分群明显，一般可以不用同型对照。CD25，FOXP3 检测需要同型对照。
2） 固定破膜剂选用不对，会导致FOXP3检测不到。推荐货号为K081的固定破膜剂。
5.Fc阻断缓冲液(Fc blocker)
一些免疫细胞，特别是单核细胞、巨噬细胞和自然杀伤细胞（NK）表面表达Fc受体（Fc Receptor），这些受体能与抗体的Fc区结合。因此，在进行这些细胞的染色实验时，需要使用商品化的Fc block试剂或血清进行阻断。Fc阻断通常在免疫染色前进行，一般在室温下孵育5-10分钟，以减少非特异性结合。
6.Monocyte阻断液（Monocyte blocker）
Monocyte blocker是一种专门用于减少单核细胞和巨噬细胞与荧光染料非特异性结合的试剂。某些荧光染料（如PE/Dazzle™ 594、PE/Cy5、PE/Cy7、APC/Cy7、APC/Fire™ 750等）可能与单核细胞和巨噬细胞发生非特异性结合，导致背景噪音或假阳性信号。这种非特异性结合会影响流式细胞术实验的准确性，因此使用Monocyte blocker可以有效减少此类干扰，确保实验结果更加可靠。
7.聚合物染料缓冲液（Polymer Dyes Staining Buffer）
聚合物染料染色缓冲液（Polymer Dyes Staining Buffer）专为流式细胞术中的聚合物染料染色设计，旨在减少染色过程中的非特异性结合和染料间的相互作用，从而提高染色的准确性和稳定性。使用BV、BUV、SB等聚合物染料时，如果同时使用多个Brilliant系列染料，建议添加Brilliant Stain Buffer或Super Bright Staining Buffer，以确保染色效果最佳，避免染料之间的干扰。
8.串联染料稳定液（Tandem stabilizer）
串联染料（如PE-Cy5、PE-Cy7、APC-Cy7等）由供体和受体两个荧光团组成。当激光激发供体时，光子通过共振能量转移（FRET）传递到受体，发出光。串联染料提供了更大的实验灵活性，但在固定过程中容易受到光漂白、化学降解或荧光团断裂的影响，导致信号减弱或补偿偏移，影响数据分析。为了防止串联染料降解，可以添加tandem stabilizer，使固定后的细胞在4℃避光条件下保存长达4天，方便后续数据采集。
缓冲液在流式细胞术中用于保护细胞、优化染色效果、减少非特异性结合、提高信号稳定性，辅助细胞固定、通透及分选，同时稳定荧光染料发色，提升多色配色实验的准确性和数据质量。若配色方案较为复杂，可在购买抗体时咨询厂家技术支持。菲恩生物提供免费配色建议、实验指导及数据分析服务，助力提升科研效率与准确性。
以下是菲恩生物流式抗体辅助试剂产品推荐
| 产品类别 | 试剂名称 | 试剂货号 | 规格 | 用途 |
| 红细胞裂解液 | 10 × 红细胞裂解液 (不含固定剂) | K080 | 100mL/200mL/500mL | 全血裂解红细胞 |
| 缓冲液 | 细胞染色缓冲液 | K079 | 100mL/200mL/500mL | 流式检测中荧光抗体的稀释和细胞的洗涤 |
| 核染色 | 碘化丙啶(PI)染色液 | K116 | 50T/100T/200T/500T | 细胞内DNA染色 |
| 7-氨基放线菌素 D(7-AAD)染色液 | K115 | 50T/100T/200T/500T | 细胞内DNA染色 | |
| DAPI染色液 | K117 | 50T/100T/200T/500T | 细胞内DNA染色 | |
| 刺激阻断 | 细胞因子激活和蛋白阻断试剂盒 | K083 | 50T/100T/200T | 刺激/阻断细胞因子 |
| 固定/破膜 | Foxp3/转录因子染色固定&破膜试剂盒 | K081 | 20T | 核内抗原染色所用固定、破膜试剂 |
| 胞内因子固定破膜剂 (即用型) | K082R | 50T/100T/500T | 胞内因子固定破膜 | |
| FcR封闭 | Purified Anti-Mouse CD16/32 Antibody | FNab30106 | 100μg | 小鼠样本封闭 |
| Purified Anti-Human CD16 Antibody | FNab10997 | 100μg | 人样本封闭 | |
| 死活染料 | Calcein AM/PI活死细胞双染试剂盒 | FNCK022 | 100T/500T | 区分死活细胞 |
| FineTest® Red 780(死活染料) | K121 | 100T | 区分死活细胞 | |
| FineTest®Violet 510（死活染料） | K124 | 100T | 区分死活细胞 |