流式细胞术整合了流体学、光学、电子及数据分析技术，用于高效分析和分选单细胞等微观粒子。通过检测荧光标记的细胞，在高速流动中逐一量化，并将数据数字化储存。该技术能够依据细胞的物理和荧光特性，从复杂的细胞混合物中精准区分并定量不同的细胞亚群，提供详细的细胞组成信息，广泛应用于生物学研究与临床诊断领域。
一、基本原理
流式细胞仪通过检测单个细胞的荧光标记和散射光特性来分析细胞。当细胞以悬液形式逐一通过激光照射区时，其内的荧光标记物吸收激光能量后发出荧光，同时产生散射光。这些信号被捕捉并转化为电信号，经计算机处理，揭示细胞大小、形状、表面标志物表达量及DNA含量等特征。
在使用流式细胞仪前，理解如何解读流式细胞图是至关重要的。常见的图表类型包括等高线图、单参数直方图和散点图等。这些图表帮助我们分析细胞的特性。为了有效解读这些图表，首先需要了解“流式通道”的概念。
二、流式细胞术的流式通道的概念
主要分为两大类：散射光通道和荧光通道。
1.散射光通道
散射光通道包括前向角散射（FSC）和侧向角散射（SSC）。
前向角散射（FSC）：反映细胞大小。细胞体积越大，产生的FSC信号越强，有助于初步区分不同大小的细胞。
侧向角散射（SSC）：指示细胞内部结构的复杂度和颗粒度。细胞内结构越复杂或颗粒越多，SSC信号越强，可用于区分细胞类型。
这两种散射信号结合使用，可以有效进行细胞分群和分类。
2.荧光通道
当细胞悬液通过流式细胞仪的流动室时，细胞逐一经过激光束照射。如果细胞表面结合了荧光素标记的抗体，荧光素在激光激发下会发出荧光信号。这些信号的强度与细胞表面结合的荧光素数量成正比，从而反映了细胞上特定分子的表达水平。荧光信号由专门的检测器捕捉，并转换为可量化的数据，用于评估细胞表面标志物的表达量。这一过程使得精确分析单个细胞的生物标志物成为可能。
三、不同流式细胞图解读
1.等高线图
流式细胞术中的等高线图使用闭合的环线来标识细胞密度相等的区域。在这些图表中，环线标志着具有相同细胞密度的地带。环线密集之处表明细胞密度变化显著，而环线中央则指向细胞聚集的核心区域。相比散点图，等高线图能更直观地展示细胞分群及密度分布情况，使观察者能够轻易识别细胞群的集中位置和密度变化的趋势。这种视觉化方式有助于更清晰地理解样本中不同细胞群体的分布特征。
2.单参数直方图
单参数直方图用于展示细胞或粒子的荧光或散射光信号强度分布。横坐标表示信号强度，单位为道数（channel），可以是线性或对数尺度，从左到右信号强度递增。纵坐标显示相对细胞或粒子数量（count），线条越高代表该信号强度下的细胞越多。
例如，在细胞周期分析中，使用DNA特异性染料（如PI）染色后，通过流式细胞仪测量荧光信号。横坐标反映与DNA含量成正比的荧光强度，纵坐标则表示具有相应信号强度的细胞数。通过这种直方图，可以根据信号分布识别出不同细胞周期阶段的细胞群体：G0/G1期（2N DNA）、S期（2N至4N之间）和G2/M期（4N DNA）。这有助于精确分析细胞周期各阶段的细胞比例。
3.散点图
散点图在流式细胞术中用于同时展示两个通道的信号强度，横坐标（X轴）和纵坐标（Y轴）分别代表一个通道的信号，如FSC、SSC或荧光信号。每个点表示一个细胞，其位置反映该细胞在两个通道上的信号强度。FSC-SSC散点图根据细胞大小和复杂度初步分群，如区分外周血中的淋巴细胞、单核细胞和粒细胞。荧光散点图则通过不同荧光通道检测特定抗原表达，实现多参数细胞分析。
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| 流式抗体推荐 | |||
| 种属 | 细胞群 | 流式抗体搭配 | 货号 |
| Human | T/B/NK细胞群检测 | CD45-PerCP | PCP-30039 |
| CD3-FITC | FITC-30004 | ||
| CD16-PE | PE-30061 | ||
| CD56-PE | PE-30008 | ||
| CD19-APC | APC-30066 | ||
| Human | Th1/Th2 细胞群检测 | CD3-PerCP/Cyanine5.5 | PCP55-30004 |
| CD4-FITC | FITC-30005 | ||
| IFN-γ-PE | PE-30053 | ||
| IL4-APC | APC-30043 | ||
| Mouse | Th1/Th2 细胞群检测 | CD3-PerCP/Cyanine5.5 | PCP55-30002 |
| CD4-FITC | FITC-30001 | ||
| IFN-γ-PE | PE-30074 | ||
| IL4-APC | APC-30026 | ||
| Human | Treg细胞群检测 | CD4-FITC | FITC-30005 |
| CD25-PE | PE-30035 | ||
| CD127-APC | APC-30033 | ||
| Mouse | Treg细胞群检测 | CD4-FITC | FITC-30001 |
| CD25-PE | PE-30017 | ||
| FOXP3-APC | APC-30055 | ||