RAW264.7细胞极化为M1型巨噬细胞具有多方面的重要意义，主要体现在以下方面：
①M1型巨噬细胞在炎症反应中起着关键作用，其极化过程涉及到多种信号通路和细胞因子的调控。通过研究RAW264.7细胞极化为M1型的过程，可以深入了解炎症反应的分机制，为炎症相关疾病的治疗提供新的靶点。
②M1型巨噬细胞具有抗肿瘤活性，能够通过分泌多种细胞毒性分子（如NO、ROS等）直接杀伤肿瘤细胞，同时还能通过分泌促炎性细胞因子激活T细胞等其他免疫细胞，增强机体的抗肿瘤免疫反应。
故很多研究中会进行RAW264.7细胞极化为M1巨噬细胞的实验。实验过程中会遇到很多问题，本文提供了RAW264.7极化为M1巨噬细胞的解决方案。
M1型巨噬细胞诱导条件：
RAW264.7细胞接6孔板，细胞铺板密度2.5x10^5个/ml，接2ml。使用完全培养基加LPS(300ng/ml)+mouse IFN-gamma(200ng/ml) 诱导48h。
完全培养基是DMEM高糖基础培养基+20%灭活特级胎牛血清+双抗。可以接5个孔，其中2个孔作为诱导组，其余3个孔不诱导。不诱导的1个孔细胞，作为流式上机的空白管，调电压和圈门。其余2个不诱导孔的细胞1个作为同型对照管，1个是全染管。同样的2个诱导孔的细胞1个作为同型对照管，1个是全染管。
细胞诱导完成后进行流式检测实验，检测步骤如下：
1.全染管
1）从6孔板中收集细胞后250g离心5min去上清，加适量PBS混匀，250g离心5min去上清。
注意：上清和贴壁消化下来的细胞都要收集。
2）加100微升的细胞染色液。加0.5ug的小鼠Fc受体封闭剂混匀，室温反应15min。
3）分别加5微升的cd11b的抗体，5微升的F4/80抗体，5微升的cd86的抗体混匀，4度反应30min。
4）加1ml的细胞染色液混匀后，250g离心5min，去上清。
5）加200微升的细胞染色液混匀后上机检测。
2.同型对照管
1）从6孔板中收集细胞后250g离心5min去上清，加适量PBS混匀，250g离心5min去上清。
注意：上清和贴壁消化下来的细胞都要收集。
2）加100微升的细胞染色液。加0.5ug的小鼠Fc受体封闭剂混匀，室温反应15min。
3）分别加5微升的cd11b的同型对照抗体，5微升的F4/80的同型对照抗体，5微升的cd86的同型对照抗体混匀，4度反应30min。
4）加1ml的细胞染色液混匀后，250g离心5min，去上清。
5）加200微升的细胞染色液混匀后上机检测。
实验结果如下：
从流式结果，很明显看到诱导出很高比例的M1型巨噬细胞。
实验所用到的试剂和流式抗体如下：
| 产品货号 | 试剂名称 |
| FITC-30072 | FITC Anti-Mouse/Human CD11b(M1/70) |
| FITC-30078 | FITC Mouse IgG2b,κ Isotype Control(MPC-11) |
| APC-30025 | APC Anti-Mouse CD86(GL-1) |
| APC-30073 | APC Rat IgG2a,κ Isotype Control(2A3) |
| PE-30096 | PE Anti-Mouse F4/80 Antibody(CI:A3-1) |
| PE-30078 | PE Mouse IgG2b,κ Isotype Control(MPC-11) |
| P0150 | Mouse IFN-gamma |
| FNab30106 | 小鼠Fc受体封闭剂 |
| SNM-002A | DMEM高糖基础培养基 |
| SNA-001 | 双抗 |
| SNS-002 | 特级胎牛血清 |