Human/Monkey CTCF (Transcriptional repressor CTCF) ELISA Kit

人/猴转录调控因子CTCF (CTCF)ELISA试剂盒
分类： 研究方向：

本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法，实验时长4小时。试剂盒中的酶标板已预先包被抗CTCF的抗体。将标准品、适度稀释的待测样品分别加入相应孔中,孵育后洗去未结合的成分。加入生物素-检测抗体，生物素-检测抗体与已经结合在包被抗体上的CTCF相结合。洗去未结合的成分后，加入HRP-链霉亲和素(SABC)。再洗去未结合的成分，加入TMB显色底物，TMB 在辣根过氧化物酶(HRP)的催化下呈现蓝色，加反应终止液后变成黄色。用酶标仪在 450 nm 波长测 OD 值。通过绘制标准曲线计算样品中CTCF的浓度。目的物质的浓度与OD450值之间呈正比。

别称: 
Transcriptional repressor CTCF ELISA Kit, 11-zinc finger protein ELISA Kit, CCCTC-binding factor ELISA Kit, CTCFL paralog ELISA Kit, CTCF ELISA Kit, CCCTC-binding factor ELISA Kit
货号: 
EHM0001
反应性: 
Human/Monkey
检测范围: 
31.25-2000pg/ml
灵敏度: 
18.75pg/ml
说明书 MSDS
规格 价格
96T RMB ¥2880
48T RMB ¥2000
货期： 三个工作日+顺丰快递时长
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  • 产品介绍
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  • 常见问题
产品名称
Human/Monkey CTCF (Transcriptional repressor CTCF) ELISA Kit
别称
Transcriptional repressor CTCF ELISA Kit, 11-zinc finger protein ELISA Kit, CCCTC-binding factor ELISA Kit, CTCFL paralog ELISA Kit, CTCF ELISA Kit, CCCTC-binding factor ELISA Kit
货号
EHM0001
规格
48T/96T
种属
Human/Monkey
UniProt ID
P49711 G8F4K8
样本类型
血清，血浆，细胞培养上清液，细胞裂解液或组织裂解液，其它生物液体样品
检测方法
Sandwich ELISA, Double Antibody
检测波长
OD450
反应时间
4小时
检测范围
31.25-2000pg/ml
灵敏度
18.75pg/ml
存储条件
2-8°C (未开封时), 切勿冻存
特异性
特异性和 CTCF 结合，与其它类似物无明显交叉反应
Elisa试剂盒组件
组件 名称 规格(48T) 规格(96T) 开启后保存条件
E001 Elisa酶标板(可拆卸) 8孔×6条 8孔×12条 将未使用的孔放入拉链铝箔袋中，并加入干燥剂，密封保存。可在2-8°C保存1个月；在-20°C保存6个月。
E002 冻干标准品 1支 2支 将未使用的标准品放入干燥剂包中。可在2-8°C保存1个月；在-20°C保存6个月。
E003 浓缩生物素-抗体  100X 1支 60ul 1支120ul 2-8°C (避光)
E034 浓缩HRP-链霉亲和素100X 1支 60ul 1支120ul
E024 TMB显色底物 1瓶 5ml 1瓶 10ml
E039 样品稀释液 1瓶 10ml 1瓶 20ml 2-8°C
E040 抗体稀释液 1瓶 5ml 1瓶 10ml
E049 SABC稀释液 1瓶 5ml 1瓶 10ml
E026 反应终止液 1瓶 5ml 1瓶 10ml
E038 浓缩洗涤液 25X 1瓶 15ml 1瓶 30ml
E006 覆膜 3张 5张  
E007 说明书 1份 1份
试剂盒组件外所需器材和试剂
  1. 酶标仪(波长450nm滤光片)
  2. 37°C恒温箱(不推荐使用细胞用CO2培养箱)
  3. 自动洗板机或多道移液器/5ml滴管(手工洗板用)
  4. 精密的单道(0.5-10μL, 5-50μL, 20-200μL, 200-1000μL)和多通道移液器(移液器使用前需校准)。
  5. 无菌的EP管及一次性吸头
  6. 吸水纸及加样槽
  7. 去离子水或蒸馏水
操作步骤概要
Elisa实验原理图
  • 步骤1： 向孔中加入100ul标准品或待测样品，贴上覆膜， 37°C静置孵育90分钟。
  • 洗板： 洗板2次。不浸泡。
  • 步骤2： 加入100ul生物素-抗体工作液，贴上覆膜， 37°C静置孵育60分钟。
  • 洗板： 洗板3次。每次浸泡1分钟。
  • 步骤3： 加入100ul HRP-链霉亲和素(SABC)工作液，贴上覆膜， 37°C静置孵育30分钟。
  • 洗板： 洗板5次。每次浸泡1分钟。
  • 步骤4： 添加90ul TMB显色底物。贴上覆膜， 37°C静置孵育10-20分钟(请使用TMB显色精准控制方法)。
  • 步骤5： 添加50ul反应终止液。立即在450nm处读取OD450值并计算。
标准曲线

本产品经品管部检测，符合使用手册的性能要求。(实验室湿度为20%-60%，温度为18°C -25°C。显色前将TMB平衡至37°C，加酶标板孔后，37°C避光孵育15分钟。)

因具体实验环境及操作存在差异，以下实验数据和标准曲线仅供参考，实验人员需根据自己的实验建立标准曲线。

STD.(pg/ml) OD-1 OD-2 Average
0 0.1 0.102 0.101
31.25 0.224 0.23 0.227
62.5 0.351 0.361 0.356
125 0.504 0.518 0.511
250 0.701 0.721 0.711
500 1.081 1.113 1.097
1000 1.599 1.645 1.622
2000 2.101 2.161 2.131
EHM0001 Standard Curve Image
回收率

将一定含量的CTCF加入样本中，并通过将测量值与样品中CTCF的预期量进行比较来计算回收率。

样品类型 回收率范围(%) 平均回收率(%)
血清(n=10) 89-104 98
EDTA血浆(n=10) 90-104 97
肝素血浆(n=10) 85-104 92
线性度

将添加有适当浓度CTCF的样品分别稀释2倍、4倍、8倍来检测，得出回收率范围。

样品类型 1:2 1:4 1:8
血清(n=10) 93-105% 89-104% 93-101%
EDTA血浆(n=10) 83-100% 83-101% 84-100%
肝素血浆(n=10) 90-98% 81-99% 80-99%
精密度（%）

板内精密度：低、中、高浓度样本分别在同1块酶标板上检测20次。

板间精密度：低、中、高浓度样本分别在3块酶标板上检测20次。

类别 板内变异系数 板间变异系数
样本 1 2 3 1 2 3
数量 20 20 20 20 20 20
平均值(pg/ml) 64 250.4 1002.9 62.44 256.1 1019
标准差 3.06 12.42 50.25 3.07 12.24 50.34
变异系数(%) 4.78 4.96 5.01 4.92 4.78 4.94
稳定性

未拆封的试剂盒在37°C和2-8°C进行稳定性实验，得出稳定性数据。

试剂盒(n=5) 37°C一个月 2-8°C六个月
平均值 (%) 80 95-100
关于试剂盒
FineTest® ELISA试剂盒中酶标板的尺寸是多少？

FineTest® ELISA试剂盒中酶标板符合微孔板的标准尺寸，127.64 mm x 85.60 mm x 14.22 mm（长x宽x高）。

FineTest®ELISA产品的保质期和稳定性如何？

自生产日期起12个月。对于特定批号的有效期，请参阅包装盒标签。所有FineTest®Elisa试剂盒在发货前已通过严格的质量测试。

FineTest®ELISA试剂盒中使用了哪些抗体克隆？

这些信息是试剂盒专有的。克隆性（多克隆或单克隆）和宿主物种的细节需要联系我们询问。

我可以混合不同批次FineTest®ELISA试剂盒中的试剂吗？

不建议这样做。FineTest®ELISA试剂针对特定批次进行了优化。

FineTest®Elisa试剂盒可以部分使用吗？

是的，Elisa板是可拆卸的，96T试剂盒拥有足够的组件体积，允许制作两组标准曲线。

冻干标准品一旦稀释，如果要继续使用，可以保存多久？

需要在12小时内用完。

标准曲线可以向任何一个方向延伸吗？

FineTest® 不能支持验证标准曲线之外的标准浓度。标准曲线范围已经过验证，在多个试剂盒批次和操作人员中具有可靠和准确的性能。 最低标准浓度是试剂盒能够保证可靠测定结果的最低限度。 添加浓度高于或低于标准曲线的标准品可能导致不一致的信号或假阳性。

样本问题
为什么FineTest® ELISA试剂盒检测血清血浆样本至少需要1/2稀释？

血清/血浆中的基质成分会影响检测结果，样本稀释液中的阻断成分会降低或消除这种干扰，并且稀释后可以尽量减少样品和标准品之间的基质差异，以获得更好的准确性。

蛋白在血清/血浆/细胞培养上清中的半衰期是多少？

FineTest®不确定样品中蛋白的半衰期，如血清、血浆或细胞培养上清。一般建议处理好的样本立即检测或将样品分装到一次性容器中并冷冻保存。避免反复冻融，以防止蛋白质降解。

对我的样品进行特定分析的期望浓度是多少？

由于每个样品都是独特的，因此很难预测，因为这可能取决于样品制备和分析的性质。请联系我们参考测试数据。

可以用FineTest®Elisa试剂盒检测多少个样本？

这取决于您的样本是否需要做复孔。例如，您可以检测80个没有重复的样本或40个重复的样本，以此类推。

操作问题
为什么所有试剂组件和待检测样本要平衡至室温后再进行加样操作？

温度是ELISA结合反应的重要影响因素。为了使所有样本在一致的温度下反应，实验前务必将所有试剂平衡至室温，包括检测样本。避免因温度的差异而导致ELISA检测结果的不准确。

ELISA实验为什么建议设置复孔？

为获得更准确的实验结果，强烈建议标准品及样本进行复孔检测。因为复孔检测可以：计算平均值，确保实验结果更准确；解决实验中误操作造成的跳孔现象；计算CV值，对实验的操作和试剂盒的精密度进行评估。

如何获得良好线性的标准曲线？

按照说明书推荐方法保存标准品；溶解标准品之前需短暂离心，彻底收集粉末；确保标准品完全溶解和混匀（大约10min），然后再进行后续的系列稀释步骤，确保每一步都充分混匀且精确移液；显色的恰当终止；选择合适的拟合方程绘制标准曲线。

酶标板是否可以堆叠在一起进行孵育？

为了确保所有板的环境条件一致，建议在孵育期间不要堆叠酶标板。

为什么在某些分析中必须使用聚丙烯管进行标准稀释？

某些蛋白质或分析物会与玻璃和聚苯乙烯结合，但不容易与聚丙烯管结合。

何时终止ELISA反应？

ELISA实验最终需要酶催化底物显色反应来完成，在最佳时间终止反应是ELISA实验成功的重要因素。加TMB后12 min左右，蓝色络合物在620nm下测值，标曲颜色最深孔OD 620nm值在0.8 - 0.9之间就可以终止显色，对应的终止OD 450nm值在2.0 - 2.5左右。如果OD 620nm值未达到0.8，可适当延长显色时间。

为什么酶标仪读数时必须选用双波长? 波长校正的目的是什么？

ELISA实验中使用双波长读数的主要目的是消除非特异性背景干扰，提高检测的准确性和可靠性。FineTest®通常建议在酶标仪中设置校正波长为570nm或630nm。直接在450nm处进行ELISA测定的读数可能更高，但准确性较低。

为什么需要4-PL曲线拟合来生成标准曲线？

FineTest®推荐ELISA分析软件使用4参数逻辑（4-PL）曲线拟合验证ELISA试剂盒。采用4-PL曲线拟合的核心目的是通过数学建模精确描述抗原 - 抗体结合的非线性动力学特征，从而提高低/高浓度样本的定量准确性，减少实验误差，确保结果可靠性和重复性。

如果样品OD值高于标准曲线最高点OD值，建议采取什么措施？

如果样品产生的OD值高于标曲最高点，应用稀释液稀释样品并重复测定，保证样本测值处于标准曲线范围内。

出版奖励
使用FineTest®Elisa试剂盒发表论文是否有奖励？

如果您使用FineTest®Elisa试剂盒发表论文，您将获得200 - 2000元京东购物卡/等价礼物，详情请联系我们。

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