常见凋亡相关靶点及检测方法

凋亡（Apoptosis）是细胞程序性死亡的一种重要形式，涉及多种分子和信号通路。细胞凋亡是指机体在生理或病理条件下，为了维持自身内环境的稳态，通过基因调控使细胞产生主动、有序的死亡；同时伴随着一系列形态和生化方面的变化，包括核固缩、DNA片段化、细胞膜重塑和起泡、细胞皱缩、形成凋亡小体等，最后凋亡的细胞被巨噬细胞吞噬而消亡。

研究凋亡过程时，常用的抗体用于检测凋亡相关蛋白的表达、活化或修饰状态。以下是一些常见的凋亡相关靶点：

1.Caspase 家族

Caspases 是凋亡过程中的关键蛋白酶，分为启动型（initiator）和效应型（effector）。

Caspase-3：效应型 Caspase，凋亡执行的关键分子。
Caspase-8：外源性凋亡通路的启动型 Caspase。
Caspase-9：内源性凋亡通路的启动型 Caspase。
Cleaved Caspase-3/8/9：检测 Caspase 的活化形式（切割后的片段）。

2.Bcl-2 家族

Bcl-2 家族蛋白调控线粒体途径的凋亡，分为抗凋亡和促凋亡成员。

Bcl-2：抗凋亡蛋白。
Bax：促凋亡蛋白，促进线粒体外膜通透性。
Bak：促凋亡蛋白，与 Bax 功能类似。
Bad：促凋亡蛋白，通过结合 Bcl-2 抑制其功能。
Bim：促凋亡蛋白，调控 Bax/Bak 的活化。

3.线粒体相关蛋白

Cytochrome c：凋亡过程中从线粒体释放到细胞质，激活 Caspase-9。
SMAC/DIABLO：线粒体释放的蛋白，抑制 IAPs（凋亡抑制蛋白）。
AIF（Apoptosis-Inducing Factor）：介导 Caspase 非依赖的凋亡途径。

4.死亡受体通路

Fas (CD95)：死亡受体，外源性凋亡通路的起始分子。
FADD (Fas-Associated Death Domain)：衔接蛋白，连接 Fas 和 Caspase-8。
TRAIL-R1/DR4 和 TRAIL-R2/DR5：TRAIL 凋亡通路的受体。

5.其他凋亡相关蛋白

PARP (Poly ADP-Ribose Polymerase)：凋亡过程中被 Caspase-3 切割，切割后的 PARP 是凋亡的标志。
p53：肿瘤抑制蛋白，调控 DNA 损伤诱导的凋亡。
IAPs (Inhibitor of Apoptosis Proteins)：如 XIAP、cIAP1/2，抑制 Caspase 活性。
Annexin V：用于检测凋亡早期细胞膜磷脂酰丝氨酸（PS）外翻。

6.常用检测方法

Western Blot：检测凋亡相关蛋白的表达和活化。
免疫荧光（IF）：观察蛋白的亚细胞定位。
流式细胞术（Flow Cytometry）：检测 Annexin V/PI 双染，区分凋亡和坏死细胞。
TUNEL 检测：标记凋亡细胞的 DNA 断裂。

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